PAR-2在皮膚瘙癢中的作用與分子機制研究.pdf

1、皮膚瘙癢(pruritus)是一種迫切搔抓愿望的皮膚感覺，瘙癢是皮膚病最常見的臨床表現(xiàn)，瘙癢的神經(jīng)生理學(xué)機制一直未被闡明，反復(fù)搔抓會釋放各種炎性因子加重皮膚損害，產(chǎn)生更為強烈的瘙癢一搔抓循環(huán)。皮肽瘙癢的臨床治療困難，目前仍無特效方法，組胺可以引起皮膚瘙癢，但是組胺受體拮抗劑治療特應(yīng)性皮炎(atopicdermatitis，AD)皮膚瘙癢的效果并不明顯，表明組胺不是特應(yīng)性皮炎等慢性皮膚瘙癢癥的主要致癢物質(zhì)。
　　 蛋白酶活化受體-

2、2(proteinase activated receptor-2，PAR-2)屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族(G protein coupled receptor，GPCR)成員，介導(dǎo)跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，可以被絲氨酸蛋白酶激活，PAR-2在包括皮膚在內(nèi)的不同組織細(xì)胞均有表達(dá)，具有廣泛的生物學(xué)活性。最新臨床研究發(fā)現(xiàn)蛋白酶活化受體-2與瘙癢的發(fā)生密切相關(guān)，和健康人體皮膚組織相比，特應(yīng)性皮炎患者的類胰蛋白酶分泌明顯增多，皮損處傳入神經(jīng)纖維PAR-2的表達(dá)

3、增多，皮下注射PAR-2激動劑可引起患者皮膚持續(xù)性瘙癢，提示類胰蛋白酶是一種強效內(nèi)源性致癢物質(zhì)，PAR-2是治療皮膚瘙癢的有益靶點，PAR-2調(diào)控皮膚瘙癢的確切分子機制尚未闡明。本課題通過構(gòu)建被動皮膚過敏反應(yīng)(passive cutaneousanaphylaxis，PCA)與特應(yīng)性皮炎樣(atopic-like dermatitis)小鼠皮膚瘙癢模型，深入研究PAR-2調(diào)控皮膚瘙癢的分子機制。
　　 第一部分過敏性皮膚瘙癢PA

4、R-2作用機制研究
　　 PAR-2是肥大細(xì)胞參與皮膚炎癥和超敏反應(yīng)的重要分子，我們通過小鼠尾靜脈注射DNP-OVA，構(gòu)建小鼠PCA模型，對PAR-2在過敏性皮膚瘙癢中的作用機制進(jìn)行研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)小鼠尾靜脈注射DNP-OVA后搔抓次數(shù)明顯增加，與空白對照組小鼠相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。鹽酸西替利嗪與酮舍林可以明顯抑制PCA小鼠的搔抓行為，鹽酸西替利嗪與酮舍林合用，PCA小鼠的搔抓次數(shù)明顯減少，與PCA小鼠相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。亮

5、肽素與PAR-2單克隆抗體可以明顯抑制PCA小鼠的搔抓行為，與PCA小鼠相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；非特異性IgG抗體組小鼠的搔抓次數(shù)未見明顯減少，與PCA小鼠相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。他克莫司可以明顯抑制PCA小鼠的搔抓行為，他克莫司與鹽酸西替利嗪合用PCA小鼠的搔抓次數(shù)明顯減少，與PCA小鼠相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。小鼠皮內(nèi)注射類胰蛋白酶搔抓次數(shù)明顯增加，他克莫司可以明顯抑制類胰蛋白酶誘導(dǎo)的瘙癢反應(yīng)。結(jié)果表明PAR-2是小鼠過敏性皮膚瘙癢的

6、重要信號分子，他克莫司對于小鼠過敏性皮膚瘙癢具有明顯的抑制作用。
　　 第二部分PAR-2調(diào)控皮膚瘙癢分子機制研究
　　 PAR-2是治療皮膚瘙癢的有益靶點，我們通過研究藥物對PAR-2活性肽(SLIGRL-NH2)誘導(dǎo)小鼠搔抓行為的影響，探討PAR-2調(diào)控皮膚瘙癢的分子機制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)皮內(nèi)注射SLIGRL-NH2，小鼠搔抓次數(shù)明顯增加，與空白對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與SLIGRL-NH2對照組相比，鹽酸西替利嗪組小

7、鼠的搔抓次數(shù)未見明顯改變，齊留通組小鼠的搔抓次數(shù)明顯減少，吲哚美辛組小鼠的搔抓次數(shù)未見明顯改變；與SLIGRL-NH2對照組相比，他克莫司組小鼠的搔抓次數(shù)明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與空白對照組相比，皮內(nèi)注射PAR-2反義肽(LRGILS-NH2)小鼠的搔抓次數(shù)未見明顯改變，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。小鼠皮內(nèi)注射SLIGRL-NH2后，花生四烯酸類代謝產(chǎn)物白三烯B4(LTB4)和前列腺素E2(PGE2)水平明顯增加，與空白對照組相比，差異有統(tǒng)計

8、學(xué)意義；與SLIGRL-NH2對照組相比，齊留通與他克莫司組小鼠皮膚LTB4水平明顯減少，鹽酸西替利嗪與吲哚美辛組小鼠皮膚LTB4水平未見明顯改變；與SLIGRL-NH2對照組相比，吲哚美辛與他克莫司組小鼠皮膚PGE2水平明顯減少，鹽酸西替利嗪與齊留通組小鼠皮膚PGE2水平未見明顯改變；與空白對照組相比，小鼠皮內(nèi)注射LRGILS-NH2，皮膚LTB4與PGE2水平未見明顯改變。SLIGRL-NH2刺激后，小鼠皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞LTB4分泌

9、量明顯增加，與空白對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與SLIGRL-NH2對照組相比，齊留通與他克莫司組角質(zhì)形成細(xì)胞LTB4分泌量明顯減少，鹽酸西替利嗪與吲哚美辛組角質(zhì)形成細(xì)胞LTB4分泌量未見明顯改變；與空白對照組相比，SLIGRL-NH2刺激后，角質(zhì)形成細(xì)胞PGE2分泌量明顯增加，與空白對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與SLIGRL-NH2對照組相比，吲哚美辛與他克莫司組角質(zhì)形成細(xì)胞PGE2分泌量明顯減少，鹽酸西替利嗪與齊留通組角質(zhì)形成細(xì)

10、胞PGE2分泌量未見明顯改變；與空白對照組相比，LRGILS-NH2刺激后，小鼠角質(zhì)形成細(xì)胞LTB4與PGE2分泌量未見明顯改變，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果表明PAR-2活性肽可以刺激角質(zhì)形成細(xì)胞分泌LTB4與PGE2，其中LTB4與PAR-2活性肽誘發(fā)的皮膚瘙癢密切相關(guān)。
　　 第三部分慢性皮膚瘙癢PAR-2作用機制研究
　　 特應(yīng)性皮炎(AD)是一種慢性、復(fù)發(fā)性、難治性炎癥性皮膚病，患者血清1gE水平明顯升高，AD患者慢

11、性皮膚瘙癢的發(fā)病機制尚未闡明。我們依據(jù)文獻(xiàn)采用卵清蛋白(ovalbumin，OVA)致敏小鼠，建立符合臨床AD病理學(xué)特征的動物模型，從整體水平比較研究AD發(fā)病前后PAR-2表達(dá)水平的變化，探討PAR-2在慢性皮膚瘙癢中的作用機制。與空白對照組相比，小鼠OVA致敏后，致敏部位表皮、真皮層均顯著增厚，伴有明顯炎性細(xì)胞浸潤；正常皮膚組織可見PAR-2陽性表達(dá)，小鼠OVA致敏后，致敏部位皮膚PAR-2陽性表達(dá)顯著增加。與空白對照組相比，小鼠OV

12、A致敏后，致敏部位皮膚PAR-2 mRNA表達(dá)與PAR-2蛋白水平明顯增加，血清IgE與類胰蛋白酶水平明顯增加。小鼠OVA致敏后，搔抓次數(shù)明顯增加，與空白對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與OVA致敏小鼠相比，鹽酸西替利嗪(10 mg/kg)組、亮肽素組、PAR-2單克隆抗體組與他克莫司(1.0％、3.0％)組小鼠的搔抓次數(shù)明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果表明PAR-2是OVA致敏小鼠皮膚瘙癢的重要信號分子，他克莫司對于OVA致敏小鼠特應(yīng)性