PAR-2激動(dòng)劑對(duì)小鼠腸動(dòng)力的影響及其作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:蛋白酶激活受體-2(Proteinase-actived receptors-2，PAR-2)屬于七次跨膜的G蛋白偶聯(lián)受體，胰蛋白酶、肥大細(xì)胞釋放的類胰蛋白酶以及人工合成的多肽SLIGRL-NH2、SLIGKV-NH2都可激活該受體。PAR-2受體在胃腸道廣泛表達(dá)，除與胃腸道上皮細(xì)胞的離子轉(zhuǎn)運(yùn)、內(nèi)臟敏感性等功能有關(guān)外，還與胃腸動(dòng)力的調(diào)控密切相關(guān)，但具體的調(diào)控機(jī)制尚未明確。本實(shí)驗(yàn)研究PAR-2 mRNA及蛋白在小鼠胃腸道的表達(dá)情況及

2、PAR-2激動(dòng)劑對(duì)小鼠胃腸動(dòng)力的影響，并著重探討PAR-2激活后對(duì)小鼠離體回腸縱行肌收縮振幅的影響及其相關(guān)作用機(jī)制。
　　方法:
　　1、分別通過(guò)RT-PCR及免疫組織化學(xué)法研究小鼠胃腸道（胃、十二指腸、空腸及回腸）中PAR-2 mRNA及蛋白的表達(dá)情況;
　　2、活體實(shí)驗(yàn):將120只雌性BABL/c小鼠隨機(jī)進(jìn)行分組，共分為6組，每組20只，分別為空白對(duì)照組、抑氨肽酶素A對(duì)照組、LRGILS-NH2（5μmol/kg）

3、+抑氨肽酶素A組、SLIGRL-NH2(1μmol/kg)+抑氨肽酶素A組，SLIGRL-NH2（2.5μmol/kg）+抑氨肽酶素A組、SLIGRL-NH2（5μmol/kg）+抑氨肽酶素A組，測(cè)定各組藥物對(duì)小鼠胃內(nèi)色素排空率和小腸推進(jìn)率的影響;
　　3、離體實(shí)驗(yàn):觀察胰蛋白酶、SLIGRL-NH2、LRGILS-NH2及各種預(yù)處理藥品（阿托品、TTX、辣椒素、NK1拮抗劑及NK2受體拮抗劑）作用后對(duì)小鼠回腸縱行肌收縮振幅的影響

4、。
　　結(jié)果:
　　1、PAR-2 mRNA在小鼠消化道（胃、十二指腸、空腸及回腸）均有廣泛表達(dá);PAR-2在小鼠消化道（胃、十二指腸、空腸及回腸）的粘膜層、粘膜下層、肌層均呈免疫陽(yáng)性反應(yīng);
　　2、在體實(shí)驗(yàn):PAR-2激動(dòng)劑對(duì)小鼠胃內(nèi)色素排空率和小腸推進(jìn)率的影響
　　2.1抑氨肽酶素A組與空白對(duì)照組相比，對(duì)小鼠胃內(nèi)色素排空率和小腸推進(jìn)率影響均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。
　　2.2與空白對(duì)照組相比，SL

5、IGRL-NH2在2.5μmol/kg及5μmol/kg濃度時(shí)均能顯著提高胃內(nèi)色素排空率和小腸推進(jìn)率(p＜0.001)。
　　2.3與空白對(duì)照組相比，LRGILS-NH2即使在5μmol/kg也不能明顯影響小腸推進(jìn)比和胃內(nèi)色素排空率(p＞0.05);
　　3、離體實(shí)驗(yàn):PAR-2激動(dòng)劑及相關(guān)工具藥對(duì)小鼠回腸縱行肌收縮振幅的影響。
　　3.1 PAR-2激動(dòng)劑（胰蛋白酶、SLIGRL-NH2）都可以增強(qiáng)小鼠離體回腸縱行肌

6、的自主收縮幅度，并呈現(xiàn)濃度依賴效應(yīng);PAR-2反肽LRGILS-NH2(10-9-10-5M)對(duì)小鼠離體回腸縱行肌的自主收縮幅度無(wú)明顯影響。
　　3.2阿托品對(duì)PAR-2引起的回腸縱行肌收縮的增強(qiáng)效應(yīng)無(wú)明顯影響。
　　3.3 TTX對(duì)PAR-2引起的回腸縱行肌收縮的增強(qiáng)效應(yīng)的影響:TTX(2uM)預(yù)處理30min+胰蛋白酶組與胰蛋白酶組相比，明顯降低了小鼠回腸縱行肌收縮幅度振幅(p＜0.05);與此類似的是TTX（2uM）預(yù)

7、處理30min+SLRGIL-NH2組與SLRGIL-NH2組相比，也明顯降低了小鼠回腸縱行肌收縮振幅(p＜0.05)。
　　3.4辣椒素對(duì)PAR-2引起的回腸縱行肌收縮的增強(qiáng)效應(yīng)的影響:辣椒素(10-4M)預(yù)處理30min+胰蛋白酶組與胰蛋白酶組相比，明顯降低了小鼠回腸縱行肌收縮振幅(p＜0.05);辣椒素(10-4M)預(yù)處理30min+SLRGIL-NH2組與SLRGIL-NH2組相比，也明顯降低了小鼠回腸縱行肌收縮振幅(p＜

8、0.05)。
　　3.5 NK1及NK2受體對(duì)PAR-2引起的回腸縱行肌收縮的增強(qiáng)效應(yīng)的影響:sc-203095(1uM)預(yù)處理30min+胰蛋白酶組與胰蛋白酶組相比，明顯降低了小鼠回腸縱行肌收縮振幅(p＜0.05);MEN10376(1uM)預(yù)處理30min+胰蛋白酶組與胰蛋白酶組相比，明顯降低了小鼠回腸縱行肌振幅(p＜0.05);sc-203095(1uM)、MEN10376(1uM)預(yù)處理30min+胰蛋白酶組與胰蛋白酶組相

9、比，明顯降低了小鼠回腸縱行肌振幅(p＜0.05);sc-203095(1uM)預(yù)處理30min+SLRGIL-NH2組與SLRGIL-NH2組相比，明顯降低了小鼠回腸縱行肌收縮振幅(p＜0.05);MEN10376組(1uM)預(yù)處理30min+SLRGIL-NH2組與SLRGIL-NH2組相比，明顯降低了小鼠回腸縱行肌收縮振幅(p＜0.05);sc-203095(1uM)、MEN10376（1uM）預(yù)處理30min+SLRGIL-NH2

10、組與SLRGIL-NH2組相比，明顯降低了小鼠回腸縱行肌收縮振幅(p＜0.001)。
　　結(jié)論:
　　1、PAR-2在小鼠的胃腸道（胃、十二指腸、空腸、回腸）中呈廣泛表達(dá)狀態(tài)，與小鼠胃腸動(dòng)力的調(diào)控密切相關(guān)。
　　2、在活體實(shí)驗(yàn)中PAR-2激活后能夠明顯的促進(jìn)小鼠胃腸道食物的通過(guò)。
　　3、在離體實(shí)驗(yàn)中PAR-2激動(dòng)劑能明顯增強(qiáng)小鼠離體回腸縱行肌的收縮振幅，并且這種增強(qiáng)作用與神經(jīng)有關(guān)，主要涉及TRPV1敏感的感覺(jué)神