甜菜蔗糖磷酸合酶基因的克隆、表達及其遺傳轉化.pdf

1、甜菜是重要的經(jīng)濟作物，蔗糖合成效率的高低是評判甜菜品種好壞的標準之一，因此，研究與蔗糖合成相關的酶也是非常必要的。蔗糖磷酸合酶(SPS)是植物蔗糖合成的關鍵酶，它在調控光合產(chǎn)物的最終分配、促進庫細胞中蔗糖的積累方面具有重要的作用。本研究從以下幾方面開展對蔗糖磷酸合酶基因的研究。
　　 1. RT-PCR克隆得到甜菜蔗糖磷酸合酶基因(BvSPS1)的克隆，對該基因的序列分析表明：BvSPS1開放閱讀框全長3138 bp，編碼104

2、5個氨基酸，所推導的蛋白質分子量為118 kDa，所推測的BvSPS1氨基酸序列跨膜區(qū)域位于第561-593位氨基酸之間。與釀酒葡萄(Vitis vinifera)的序列同源性是75.45%、煙草（Nicotiana tabacum)為74.59%。
　　 2. 利用半定量RT-PCR分析了BvSPS1基因在甜菜中的表達，結果顯示，該基因在根部的表達水平遠遠高于葉柄及葉，表達方式屬于組織特異性表達。對甜菜各部位的SPS酶活性分析

3、同樣表明該酶在根部的活性高于其它部位。葡萄糖及蔗糖對BvSPS1基因的表達產(chǎn)生不同的影響，葡萄糖能夠強化BvSPS1基因的表達，且表達量與處理時間相關。
　　 3. 建立了甜菜的遺傳轉化體系，研究結果表明葉柄的再生能力較強，甜菜葉柄在6-BA 1.0 mg/L與IAA 0.3 mg/L激素組合的培養(yǎng)基上，再生率較高，均提高至約14.0%。利用農(nóng)桿菌介導方法將BvSPS1基因導入甜菜，并獲得了轉基因植株，PCR結果為陽性。