人星形細(xì)胞瘤中VMP1表達(dá)及其與腫瘤生物活性的關(guān)系.pdf

1、研究背景:
　　 膠質(zhì)瘤是最常見的原發(fā)性顱內(nèi)腫瘤，其中約21.2％～51.6％是星形細(xì)胞腫瘤。星形細(xì)胞瘤最重要的特征是腫瘤細(xì)胞無限增殖，呈彌漫性、侵潤性生長，即使現(xiàn)代顯微神經(jīng)外科技術(shù)也難以做到病理學(xué)上的完全切除，同時(shí)大多數(shù)星形細(xì)胞瘤對(duì)放療、化療不敏感，因而治療后易復(fù)發(fā)，且隨著手術(shù)和復(fù)發(fā)次數(shù)的增加，其惡性程度有上升趨勢(shì)，因此星形細(xì)胞瘤總體預(yù)后不佳。目前已證實(shí)腫瘤細(xì)胞凋亡機(jī)制受遏、細(xì)胞異常增殖、細(xì)胞周期調(diào)控紊亂等調(diào)節(jié)機(jī)制失衡均是星形

2、細(xì)胞腫瘤發(fā)生、發(fā)展的原因，因此細(xì)胞凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移和細(xì)胞周期調(diào)控的分子機(jī)制及尋找相關(guān)的關(guān)鍵靶點(diǎn)成為星形細(xì)胞瘤的研究熱點(diǎn)。
　　 泡膜蛋白-1(Vacuole Membrane Protein-1，VMP1)又稱跨膜蛋白49(Transmembrane Protein 49，TMEM49)為2002年DusettiNJ等在小鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的一種與急性胰腺炎有關(guān)的蛋白質(zhì)，在胰腺細(xì)胞內(nèi)過表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)空泡的形成，并且融合到這些空泡的細(xì)胞膜上

3、，因此而得名。研究表明VMP1有多種生物學(xué)功能：在急性胰腺炎中VMP1過表達(dá)可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡產(chǎn)生；VMP1參與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)，作用于S期，對(duì)細(xì)胞增殖起抑制作用；VMP1能在細(xì)胞表面形成特定“接觸點(diǎn)”，通過與細(xì)胞間緊密連接標(biāo)記蛋白閉鎖小帶-1(Zonula Occludens，ZO-1)相互作用，在細(xì)胞間建立緊密連接，干擾VMP1表達(dá)后導(dǎo)致細(xì)胞間連接無法建立；VMP1可通過Atg域與哺乳動(dòng)物自噬起始因子Beclin-1相互作用，這是形成自噬吞

4、噬體的關(guān)鍵所在，VMP1表達(dá)下降后可抑制細(xì)胞內(nèi)自噬。來自動(dòng)物和人類腫瘤的研究均顯示VMP1不僅對(duì)細(xì)胞凋亡進(jìn)行調(diào)節(jié)，而且在多種腫瘤細(xì)胞發(fā)生、發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移過程中起重要作用，證實(shí)VMP1基因是一種新的抑癌基因。目前VMP1在星形細(xì)胞瘤方面的研究報(bào)道尚少，本課題旨在初步闡明VMP1在人星形細(xì)胞瘤中的表達(dá)規(guī)律，進(jìn)而探討其表達(dá)與腫瘤生物活性的關(guān)系。
　　 研究目的:
　　 1.初步探討正常星形細(xì)胞系和星形細(xì)胞瘤細(xì)胞系中VMP1 m

5、RNA及蛋白的表達(dá)。
　　 2.初步闡明人腦星形細(xì)胞瘤中VMP1的表達(dá)規(guī)律。
　　 3.探討星形細(xì)胞瘤中VMP1表達(dá)與腫瘤生物活性的關(guān)系。
　　 材料和方法:
　　 1.培育正常星形細(xì)胞系(NHA)和星形細(xì)胞瘤細(xì)胞系(LN18、A172、SNB19、LN444、LN464)，六種細(xì)胞系均由中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院黎孟楓教授惠贈(zèng)。收集6例正常腦組織標(biāo)本和87例星形細(xì)胞瘤患者手術(shù)切除新鮮標(biāo)本。星形細(xì)胞瘤患者均有完整

6、臨床資料包括性別、年齡、病理分級(jí)、波形蛋白(Vimentin)、Ki-67增殖指數(shù)(Ki-67Labbing index，Ki-67LI)等。
　　 2.免疫組織化學(xué)、半定量RT-PCR檢測(cè)上述細(xì)胞系VMP1蛋白及mRNA的表達(dá)。免疫組織化學(xué)法檢測(cè)93例標(biāo)本中VMP1的表達(dá)規(guī)律。
　　 3.使用染色系數(shù)(SI)半定量評(píng)價(jià)VMP1染色情況，根據(jù)積分光密度值比值評(píng)估m(xù)RNA表達(dá)差異。
　　 4.結(jié)合臨床資料分析VMP

7、1表達(dá)與星形細(xì)胞瘤病理級(jí)別、Vimentin、Ki-67LI、可能存在的關(guān)系。
　　 5.全部數(shù)據(jù)由SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件完成統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，t檢驗(yàn)用于定量資料間的比較，x2檢驗(yàn)用于定性資料間的比較，Spearman's相關(guān)性檢驗(yàn)用于變量間的相關(guān)性分析。檢驗(yàn)過程均以p值小于0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.人正常星形細(xì)胞系和星形細(xì)胞瘤細(xì)胞系中均可見VMP1蛋白表達(dá)，呈胞漿型，星形細(xì)胞瘤細(xì)胞系中VM

8、P1染色指數(shù)較正常星形細(xì)胞系低。
　　 2.根據(jù)相對(duì)積分密度值比值顯示人正常星形細(xì)胞系(NHA)中VMP1 mRNA表達(dá)分別是惡性星形細(xì)胞瘤細(xì)胞系(LN18、A172、SNB19、LN444、LN464)表達(dá)量的4.4、3.1、1.5、1.6、1.3倍。
　　 3.VMP1蛋白在人正常腦組織和星形細(xì)胞瘤標(biāo)本中有表達(dá)，分布于細(xì)胞漿，在各級(jí)星形細(xì)胞瘤中VMP1蛋白陽性率為：Ⅰ級(jí)100％(17/17)，Ⅱ級(jí)92％(23/25)

9、，Ⅲ級(jí)21.4％(6/28)，Ⅳ級(jí)11.7％(2/17)。Spearman's相關(guān)分析顯示，VMP1表達(dá)與星形細(xì)胞瘤病理級(jí)別呈負(fù)相關(guān)(r=-0.907，P=0.034)。
　　 4.在高級(jí)別星形細(xì)胞瘤患者中VMP1高表達(dá)比例為2.27％，而在低級(jí)別患者中則為92.85％(x2=71.848，P＜0.001)；Vimentin陽性患者中VMP1高表達(dá)比例為27.27％,在陰性患者中比例為78.12％(x2=5.553，P=0.01

10、8)；Ki-67LI大于8％患者中VMP1高表達(dá)比例為19.60％，在小于等于8％患者中比例為83.33％(x2=34.503，P＜0.001)。Spearman's相關(guān)分析顯示，VMP1表達(dá)與星形細(xì)胞瘤病理級(jí)別(r=-0.909，P＜0.001)、Vimentin(r=-0.253，P=0.018)、Ki-67LI(r=-0.630，P＜0.001)均呈負(fù)相關(guān)。
　　 結(jié)論:
　　 1.人正常星形細(xì)胞系和星形細(xì)胞瘤細(xì)胞