螺旋藻蛋白提取及其酶解產(chǎn)物對ACE抑制活性的研究.pdf

1、采用不同的蛋白提取方法獲得螺旋藻蛋白并通過酶解的方法獲得具有ACE抑制作用的水解產(chǎn)物，通過體外實(shí)驗和體內(nèi)實(shí)驗對其抗血壓升高作用進(jìn)行評價。在蛋白提取中，對超聲波法、高壓均質(zhì)法和反復(fù)凍融法的蛋白提取條件進(jìn)行了優(yōu)化，在三種方法各自的最佳提取條件下，螺旋藻蛋白的溶出率分別達(dá)到了71.51％、73.87％和72.03％。通過對蛋白溶出率進(jìn)行比較，確定了以高壓均質(zhì)法為主要方法的提取手段。在蛋白分離過程中，確定了乙醇沉淀法和等電點(diǎn)沉淀法相結(jié)合的實(shí)驗方

2、法對螺旋藻蛋白進(jìn)行分離。結(jié)果表明最佳分離條件為蛋白分離液pH值為4.4，乙醇濃度為70％，此條件下螺旋藻蛋白得率達(dá)到了55.14％，其中蛋白純度為85.21％。水解過程是以胃蛋白酶、胰蛋白酶以及兩種酶復(fù)合對螺旋藻蛋白進(jìn)行水解，以ACE抑制率為評價指標(biāo)對水解條件進(jìn)行了優(yōu)選。結(jié)果顯示，胃蛋白酶水解的最佳條件為水解溫度37℃，酶與底物比1:50，pH值為3.0，底物濃度為5％。胰蛋白酶水解的最佳條件為水解溫度42℃，酶與底物比1:50，pH值

3、為8.0，底物濃度為6％。胃蛋白酶、胰蛋白酶和復(fù)合酶水解產(chǎn)物的IC50值分別為0.104mg/mL、0.017mg/mL和0.087mg/mL。在體內(nèi)評價過程中，以最佳水解條件下獲得的胃蛋白酶水解產(chǎn)物、胰蛋白酶水解產(chǎn)物和復(fù)合酶水解產(chǎn)物為受試藥品，以9周齡SHR大鼠為實(shí)驗動物，以不同劑量(5g/kg、1g/kg、0.2g/kg)對SHR大鼠進(jìn)行灌胃，在0-8h內(nèi)監(jiān)測其尾動脈血壓的變化，判斷各水解產(chǎn)物的抗血壓升高作用。結(jié)果表明，胃蛋白酶水解