小鼠IL-21瘤苗抗腫瘤效應(yīng)及機(jī)制的研究.pdf

1、目的：建立穩(wěn)定表達(dá)小鼠白細(xì)胞介素21(mlL-21)的瘤苗，觀察其在小鼠體內(nèi)是否能夠誘導(dǎo)有效的抗腫瘤免疫反應(yīng)及免疫記憶效應(yīng)，并探討IL-21瘤苗抗腫瘤的可能作用機(jī)制。 方法：將已鑒定的重組質(zhì)粒pcDNA3．1/mlL-21用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染SP2/0細(xì)胞制備瘤苗，用G-418壓力篩選， RT-PCR法鑒定瘤苗中mIL-21的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。體外流式細(xì)胞儀檢測(cè)瘤苗細(xì)胞表面MHC-Ⅰ類分子、CD80分子的表達(dá)，通過細(xì)胞周期反映瘤苗體外增殖活

2、性。瘤苗細(xì)胞接種Balb/c小鼠，通過監(jiān)測(cè)腫瘤生長(zhǎng)情況，觀察mlL-21瘤苗誘導(dǎo)的抗腫瘤效應(yīng)。以CFSE，7-AAD標(biāo)記，流式細(xì)胞儀檢測(cè)NK、CTL等免疫細(xì)胞活性、RT-PCR法檢測(cè)腫瘤組織CXC家族趨化因子I-TAC的表達(dá)、ELISA法檢測(cè)血清IFN-γ和IL-4含量、SP2/0瘤細(xì)胞二次攻擊未長(zhǎng)腫瘤實(shí)驗(yàn)小鼠等方法探討瘤苗SP2/0-mlL-21可能的作用機(jī)制。 結(jié)果：得到穩(wěn)定表達(dá)mlL-21的瘤苗SP2/0-mIL-21，其

3、表面MHC-Ⅰ類分子表達(dá)明顯上調(diào)。與對(duì)照組相比，體外增殖活性無差異。皮下接種瘤苗SP2/0．mIL-21到Balb/c小鼠后，腫瘤生長(zhǎng)緩慢，部分小鼠腫瘤消失或無瘤生長(zhǎng)、長(zhǎng)期存活，給予野生株SP2/0瘤細(xì)胞再次攻擊腫瘤消失或無瘤實(shí)驗(yàn)小鼠，4周后75﹪仍未見腫瘤生長(zhǎng)；實(shí)驗(yàn)小鼠NK、CTL細(xì)胞毒活性有意義增強(qiáng)；腫瘤組織內(nèi)檢測(cè)到I-FAC的表達(dá)；血清IFN-γ水平明顯上升，IL-4無明顯增高。 結(jié)論：成功構(gòu)建mIL-21瘤苗，接種Bal