粘細(xì)菌抗腫瘤活性物質(zhì)篩選及對(duì)荷瘤小鼠抑瘤活性和機(jī)制研究.pdf

1、本論文對(duì)河北省微生物多樣性研究與應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室保藏的100株粘細(xì)菌的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行了體外細(xì)胞毒篩選，100個(gè)發(fā)酵液樣品中對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7有抑制作用的達(dá)到82%，說(shuō)明粘細(xì)菌次級(jí)代謝產(chǎn)物對(duì)腫瘤細(xì)胞具有普遍的細(xì)胞毒作用。一個(gè)好的抗腫瘤藥物不僅需要對(duì)腫瘤細(xì)胞有強(qiáng)大的殺傷作用，而且需對(duì)人正常細(xì)胞有很小的損害，通過(guò)對(duì)正常二倍體人胚肺成纖維細(xì)胞存活率的測(cè)定，選取2#、15#、24#、37#、66#、87#等6株粘細(xì)菌的發(fā)酵產(chǎn)物，通過(guò)利用人子宮頸癌H

2、eLa細(xì)胞和人肺腺癌A549進(jìn)行復(fù)篩，結(jié)果顯示15#菌株發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)A549和HeLa抑制作用較強(qiáng)，72h的IC50分別為6.66μg/mL和14.70μg/mL，且其抑制作用具有較好的時(shí)效關(guān)系，對(duì)人正常二倍體MRC細(xì)胞毒性較小，其實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好，初篩和復(fù)篩結(jié)果相互印證，有開(kāi)發(fā)成為抗腫瘤藥物的潛能，選擇進(jìn)行下一步組分分析。
　　選擇甲醇和乙腈作為流動(dòng)相分別對(duì)15#菌株發(fā)酵代謝產(chǎn)物進(jìn)行梯度洗脫，通過(guò)比較可知乙腈對(duì)代謝產(chǎn)物的洗脫能力較強(qiáng)，

3、確定15#菌株發(fā)酵代謝產(chǎn)物的最適分離條件為乙腈：水=49:51（體積比），檢測(cè)波長(zhǎng)為350nm，15#菌株發(fā)酵產(chǎn)物分離得到了5個(gè)組分，對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：15-1組分具有很好的量效對(duì)應(yīng)關(guān)系，當(dāng)終濃度為100μg/mL時(shí)，15-1對(duì)人乳腺癌細(xì)胞的抑制率分別為71.73%，其它組分的抑制效果則不明顯，說(shuō)明15-1組分抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的活性是較強(qiáng)的。
　　菌株91018是本實(shí)驗(yàn)室已篩選出來(lái)的具有抗腫瘤活性的菌株，

4、根據(jù)已摸索好的液相分離條件，制備菌株91018發(fā)酵產(chǎn)物單組分91018-1，當(dāng)終濃度為100μg/mL時(shí)，對(duì)人子宮頸癌細(xì)胞和人乳腺癌細(xì)胞的抑制率分別為69.19%和22.59%。
　　荷瘤小鼠抑瘤實(shí)驗(yàn)顯示91018-1單組分1.25mg/kg劑量組對(duì)于小鼠肝癌H22腫瘤細(xì)胞的抑瘤率最高，達(dá)到48.7%，劑量過(guò)大或過(guò)小都不利于抑瘤效果。陽(yáng)性對(duì)照環(huán)磷酰胺的抑瘤率達(dá)到81.3%，但小鼠體征不好。第8天陽(yáng)性對(duì)照組小鼠有一只死亡，說(shuō)明環(huán)磷酰

5、胺的毒性較大，嚴(yán)重影響了小鼠的健康，而1.25mg/kg劑量組小鼠活動(dòng)自如，皮毛光滑，食量較正常，體重有明顯增加。說(shuō)明1.25mg/kg劑量的91018-1組分對(duì)小鼠肝癌H22腫瘤生長(zhǎng)有一定的抑制作用，并且對(duì)小鼠的毒性較少。流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)1.25mg/Kg實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率比陰性對(duì)照組明顯提高，PI細(xì)胞增殖指數(shù)樣品1.25mg/Kg實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組存在顯著差異，說(shuō)明1.25mg/Kg實(shí)驗(yàn)組S和G2/M期的細(xì)胞減少，細(xì)胞被阻止在G0/