粘細菌抗腫瘤活性物質(zhì)篩選及對荷瘤小鼠抑瘤活性和機制研究.pdf

1、本論文對河北省微生物多樣性研究與應用實驗室保藏的100株粘細菌的發(fā)酵產(chǎn)物進行了體外細胞毒篩選，100個發(fā)酵液樣品中對人乳腺癌細胞MCF-7有抑制作用的達到82%，說明粘細菌次級代謝產(chǎn)物對腫瘤細胞具有普遍的細胞毒作用。一個好的抗腫瘤藥物不僅需要對腫瘤細胞有強大的殺傷作用，而且需對人正常細胞有很小的損害，通過對正常二倍體人胚肺成纖維細胞存活率的測定，選取2#、15#、24#、37#、66#、87#等6株粘細菌的發(fā)酵產(chǎn)物，通過利用人子宮頸癌H

2、eLa細胞和人肺腺癌A549進行復篩，結果顯示15#菌株發(fā)酵產(chǎn)物對A549和HeLa抑制作用較強，72h的IC50分別為6.66μg/mL和14.70μg/mL，且其抑制作用具有較好的時效關系，對人正常二倍體MRC細胞毒性較小，其實驗重復性好，初篩和復篩結果相互印證，有開發(fā)成為抗腫瘤藥物的潛能，選擇進行下一步組分分析。
　　選擇甲醇和乙腈作為流動相分別對15#菌株發(fā)酵代謝產(chǎn)物進行梯度洗脫，通過比較可知乙腈對代謝產(chǎn)物的洗脫能力較強，

3、確定15#菌株發(fā)酵代謝產(chǎn)物的最適分離條件為乙腈：水=49:51（體積比），檢測波長為350nm，15#菌株發(fā)酵產(chǎn)物分離得到了5個組分，對人乳腺癌細胞MCF-7的抑制實驗結果表明：15-1組分具有很好的量效對應關系，當終濃度為100μg/mL時，15-1對人乳腺癌細胞的抑制率分別為71.73%，其它組分的抑制效果則不明顯，說明15-1組分抑制腫瘤細胞生長的活性是較強的。
　　菌株91018是本實驗室已篩選出來的具有抗腫瘤活性的菌株，

4、根據(jù)已摸索好的液相分離條件，制備菌株91018發(fā)酵產(chǎn)物單組分91018-1，當終濃度為100μg/mL時，對人子宮頸癌細胞和人乳腺癌細胞的抑制率分別為69.19%和22.59%。
　　荷瘤小鼠抑瘤實驗顯示91018-1單組分1.25mg/kg劑量組對于小鼠肝癌H22腫瘤細胞的抑瘤率最高，達到48.7%，劑量過大或過小都不利于抑瘤效果。陽性對照環(huán)磷酰胺的抑瘤率達到81.3%，但小鼠體征不好。第8天陽性對照組小鼠有一只死亡，說明環(huán)磷酰

5、胺的毒性較大，嚴重影響了小鼠的健康，而1.25mg/kg劑量組小鼠活動自如，皮毛光滑，食量較正常，體重有明顯增加。說明1.25mg/kg劑量的91018-1組分對小鼠肝癌H22腫瘤生長有一定的抑制作用，并且對小鼠的毒性較少。流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)1.25mg/Kg實驗組細胞凋亡率比陰性對照組明顯提高，PI細胞增殖指數(shù)樣品1.25mg/Kg實驗組與陰性對照組存在顯著差異，說明1.25mg/Kg實驗組S和G2/M期的細胞減少，細胞被阻止在G0/