肥大細(xì)胞在胃癌中分布、表型及其免疫抑制作用的初步研究.pdf

1、胃癌是最常見的腫瘤之一,其死亡率在腫瘤中位居第二。盡管關(guān)于胃癌的診斷方法和治療藥物的研究非常廣泛,晚期的胃癌患者仍具有不良的預(yù)后以及較差的生活質(zhì)量,其治療方法依然只是依賴于傳統(tǒng)的細(xì)胞毒性化療。
　　研究證明,腫瘤微環(huán)境在塑造腫瘤成型及腫瘤演化中的作用越來越重要。腫瘤微環(huán)境由多種成分組成,包括細(xì)胞器,腫瘤克隆群,基質(zhì)細(xì)胞如上皮細(xì)胞,成纖維細(xì)胞,血管上皮細(xì)胞,以及多種固有性和適應(yīng)性免疫細(xì)胞。胃癌實(shí)體瘤中的細(xì)胞除了有癌細(xì)胞外,還包含腫瘤

2、微環(huán)境中固有成分及遷移進(jìn)來的細(xì)胞。腫瘤微環(huán)境中的各個(gè)免疫細(xì)胞間的調(diào)控,對(duì)胃癌的進(jìn)程有著重要的影響,這些免疫細(xì)胞很有可能成為未來胃癌治療的靶點(diǎn)。
　　肥大細(xì)胞來源于骨髓,在骨髓中作為未成熟的祖細(xì)胞遷移到外周組織則分化為成熟細(xì)胞。先前的研究表明,肥大細(xì)胞在變態(tài)反應(yīng)及病原體感染免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要生物學(xué)作用。最新的研究表明,肥大細(xì)胞被認(rèn)為是腫瘤微環(huán)境的調(diào)控因子,它主要可以通過以下幾個(gè)方面影響腫瘤的進(jìn)程,首先,肥大細(xì)胞與血管生成關(guān)系密切,通

3、過分泌促血管生成因子或與其他細(xì)胞相互作用來促進(jìn)血管生成從而促進(jìn)腫瘤生長;其次肥大細(xì)胞可以促進(jìn)組織內(nèi)重塑促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移;再次,肥大細(xì)胞通過免疫調(diào)節(jié)影響腫瘤生長。但是,在人類腫瘤微環(huán)境中肥大細(xì)胞到底是發(fā)揮怎樣的作用,促腫瘤還是抑制腫瘤的作用,需要我們進(jìn)一步研究。盡管越來越多的研究證據(jù)表明肥大細(xì)胞在腫瘤中侵潤增加,其功能機(jī)制的研究還在探索中,其在腫瘤微環(huán)境中的準(zhǔn)確的作用還不完全知道。在胃癌中,肥大細(xì)胞的分布、表型以及功能至今尚未明確,亟

4、待研究。
　　目的:
　　1.明確肥大細(xì)胞在胃癌中的分布;
　　2.研究肥大細(xì)胞在胃癌中的表型特征和趨化因子受體的表達(dá)。
　　3.初步探討肥大細(xì)胞在胃癌中的免疫抑制功能。
　　方法:
　　1.肥大細(xì)胞在胃癌中的分布及表型檢測(cè)
　　在重慶西南醫(yī)院普外科收集胃癌病人新鮮外周血和胃癌組織標(biāo)本。采用流式細(xì)胞術(shù),檢測(cè)肥大細(xì)胞的分布情況。運(yùn)用免疫組化染色檢測(cè)肥大細(xì)胞的原位分布。H&E染色明確胃組織病理學(xué)情況

5、。流式細(xì)胞術(shù)分析MC細(xì)胞表型。
　　2.肥大細(xì)胞在胃癌中的表型特征和趨化因子受體的表達(dá)
　　采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)胃癌中肥大細(xì)胞共刺激分子CD80、CD86和HLA-DR的表達(dá),并篩選趨化因子受體。
　　3.肥大細(xì)胞系(HMC-1)與胃癌細(xì)胞系共培養(yǎng)及炎性細(xì)胞因子檢測(cè)。
　　將HMC-1細(xì)胞和BGC-823細(xì)胞按1:1的比例,或單獨(dú)加BGC-823細(xì)胞,或單獨(dú)加HMC-1細(xì)胞,收集培養(yǎng)上清,ELISA檢測(cè)IL-6及T

6、NF-ɑ蛋白水平。
　　4.HMC-1細(xì)胞對(duì)人CD3+T細(xì)胞的增殖的調(diào)控作用
　　分別用胃癌組織培養(yǎng)上清、正常胃組織培養(yǎng)上清、胃細(xì)胞系培養(yǎng)(AGS)上清及胃上皮細(xì)胞系(GES-1)培養(yǎng)上清,刺激HMC-1細(xì)胞使成為條件性HMC-1細(xì)胞,磁珠分選正常人外周血CD3+T細(xì)胞,并CSFE標(biāo)記,與刺激后的HMC-1細(xì)胞共培養(yǎng),分別在5天后,收集細(xì)胞并上流式細(xì)胞儀檢測(cè),分析T細(xì)胞的增殖情況。
　　結(jié)果:
　　1.肥大細(xì)胞在

7、胃癌中的分布。
　　1.1胃癌患者和健康人外周血肥大細(xì)胞的比例分別為0.892％、1.22%,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析胃癌患者外周血中肥大細(xì)胞的百分比與正常人外周血的相比無明顯差異(P>0.05)。肥大細(xì)胞在胃癌組織、癌旁組織及正常組織中占CD45+細(xì)胞的比例分別為14.39%,11.77%和11.81%;經(jīng)分析胃癌組織中的肥大細(xì)胞的百分比較癌旁組織和正常組織顯著增高(P<0.05)。
　　1.2免疫組化結(jié)果顯示,相比于正常組織肥大細(xì)胞

8、在胃癌組織中明顯浸潤。上述結(jié)果提示,肥大細(xì)胞在胃癌微環(huán)境中浸潤增高。
　　2.胃癌中肥大細(xì)胞表型特征和趨化因子受體表達(dá)情況。
　　2.1胃癌組織中浸潤的肥大細(xì)胞較其他組織表達(dá)共刺激分子CD80,CD86無明顯差異,但高表達(dá)HLA-DR。這提示胃癌組織中的肥大可能具有免疫抑制表型。
　　2.2胃癌組織中的肥大細(xì)胞幾乎不表達(dá)趨化因子受體CCR2,CXCR2,CXCR3,但高表達(dá)CXCR4。而癌旁組織和非腫瘤正常組織表達(dá)CX

9、CR4的肥大細(xì)胞顯著降低。
　　3. HMC-1細(xì)胞對(duì)胃癌細(xì)胞系分泌炎性因子的影響。
　　在肥大細(xì)胞系HMC-1和胃癌細(xì)胞系BGC-823細(xì)胞共培養(yǎng)體系中,單獨(dú)培養(yǎng)BGC-823則有較多IL-6,TNF-ɑ分泌,而在BGC-823細(xì)胞培養(yǎng)過程中加HMC-1細(xì)胞后,TNF-ɑ、IL-6蛋白水平明顯降低(P<0.05);說明肥大細(xì)胞能抑制胃癌腫瘤細(xì)胞的促炎癥作用,間接說明肥大細(xì)胞具有一定的免疫抑制功能。
　　4. HMC-

10、1細(xì)胞對(duì)CD3+T細(xì)胞的增殖的調(diào)控作用
　　腫瘤組織培養(yǎng)上清,胃癌腫瘤細(xì)胞系培養(yǎng)上清刺激后的HMC-1細(xì)胞相比正常組織培養(yǎng)上清,胃正常細(xì)胞系培養(yǎng)上清,能明顯抑制CD3+T細(xì)胞的增殖。
　　結(jié)論:
　　1.肥大細(xì)胞在胃癌組織中侵潤增加,并具有免疫抑制表型。
　　2.胃癌組織中的肥大細(xì)胞高表達(dá)CXCR4。
　　3. HMC-1抑制胃癌腫瘤細(xì)胞系的促炎作用。
　　4.條件性的HMC-1抑制CD3+T細(xì)胞的增