小兒淋巴管瘤細(xì)胞增殖動力學(xué)研究.pdf

1、[目的]淋巴管瘤(lymphangioma)是小兒外科的常見良性腫瘤，為先天性發(fā)育異常，屬錯構(gòu)瘤，其發(fā)病率僅次于血管瘤，居第二位。淋巴管瘤在組織學(xué)上可以分為單純性淋巴管瘤、海綿狀淋巴管瘤、囊狀淋巴管瘤三種類型，其中囊狀淋巴管瘤最常見，有文獻(xiàn)報道囊狀淋巴管瘤約占80.9％。盡管小兒淋巴管瘤是常見的疾病，但是淋巴管瘤的病因以及發(fā)病機(jī)制尚未定論。目前主要有兩種觀點：一是認(rèn)為淋巴管瘤是一種淋巴管畸形，是由淋巴管先天發(fā)育異常所致，或淋巴液淤積、淋

2、巴管擴(kuò)張引起。二是認(rèn)為淋巴管瘤是一種良性腫瘤，是由淋巴管組織異常增殖而成。核仁組成區(qū)相關(guān)蛋白(silver-bindingnucleolarorganizerregion，AgNOR)作為核糖體RNA(rRNA)轉(zhuǎn)錄活動的標(biāo)志，與細(xì)胞周期的動態(tài)變化相關(guān)。細(xì)胞內(nèi)AgNOR的數(shù)目增加、形態(tài)變化可以反映細(xì)胞增殖活性、染色體倍體、轉(zhuǎn)錄活性的變化，因此通過研究AgNOR的數(shù)目和分布就可以了解細(xì)胞增殖情況。增殖細(xì)胞核抗原(proliferating

3、cellnuclearantigen，PCNA)是細(xì)胞DNA合成期必不可少的因子，其變化與DNA合成一致。作為反映細(xì)胞增殖功能的標(biāo)記物，它有效地反映惡性腫瘤細(xì)胞增生，但PCNA在淋巴管瘤中是否陽性表達(dá)的報道卻極少。流式細(xì)胞測量術(shù)(flowcytome-try，F(xiàn)CM)通過分析腫瘤細(xì)胞內(nèi)DNA含量(DI)、異倍體出現(xiàn)及S期細(xì)胞比例(sphasefraction，SPF)、細(xì)胞增殖指數(shù)(proliferationindex，PI)，反映細(xì)胞

4、增殖情況，目前已成為腫瘤臨床診斷、療效評價及預(yù)后推測的重要的參考依據(jù)。本研究應(yīng)用以上技術(shù)檢測了小兒頸部囊狀淋巴管瘤56例，通過研究小兒頸部囊狀淋巴管瘤的內(nèi)皮細(xì)胞增殖情況和是否存在惡變趨勢，探討該病發(fā)病機(jī)制并進(jìn)一步深入研究其病理變化。 [方法]從1999年1月至2005年6月收集接受手術(shù)治療56例小兒頸部囊狀淋巴管瘤患者的石蠟標(biāo)本為實驗組，以16例大月份引產(chǎn)胎兒的胸導(dǎo)管作為正常對照組。采用AgNOR染色，免疫組化的方法檢測PCNA

5、，流式細(xì)胞儀檢測DNA含量、S期細(xì)胞比例、細(xì)胞增殖指數(shù)，結(jié)合臨床病理參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，分析各組上述指標(biāo)與淋巴管瘤患者性別的關(guān)系。分析小兒頸部囊狀淋巴管瘤細(xì)胞與正常淋巴管組織中AgNOR染色、PCNA陽性表達(dá)、流式細(xì)胞測量術(shù)分析囊狀淋巴管瘤細(xì)胞的DNA含量、S期細(xì)胞比例、細(xì)胞增殖指數(shù)，是否有差異顯著性。 分析小兒頸部囊狀淋巴管瘤組織和胸導(dǎo)管中的AgNoR顆粒數(shù)目、異形/規(guī)則顆粒、PCNA、DNA倍體分析、S期比率、增殖指數(shù)是否有

6、差異顯著性；AgNOR陽性分型、PCNA、DNA倍體分析在小兒頸部囊狀淋巴管瘤中表達(dá)是否與性別有關(guān)。 (1)AgNOR陽性分型在小兒頸部囊狀淋巴管瘤中的表達(dá)與性別關(guān)系16例正常胸導(dǎo)管組織中未見有AgNOR陽性表達(dá)；56例小兒頸部囊狀淋巴管瘤組織中AgNOR陽性表達(dá)12例(12/56)，其中男性患兒陽性表達(dá)8例(8/56)，女性陽性表達(dá)4例(4/56)，經(jīng)統(tǒng)計分析，男女之間無差異顯著性(P＞0.05)。 (2)AgNoR顆

7、粒數(shù)目、異形/規(guī)則顆粒在小兒頸部囊狀淋巴管瘤和正常淋巴管結(jié)果比較 56例囊狀淋巴管瘤患者中，AgNoR顆粒數(shù)目為1.151±0.358，異形/規(guī)則顆粒為0.217±0.052；16例囊狀淋巴管瘤患者中，AgNoR顆粒數(shù)目為0.912±0.235，異形/規(guī)則顆粒為0.143±0.028，經(jīng)統(tǒng)計分析，無差異顯著性(P＞0.05)。 (3)PCNA陽性在小兒頸部囊狀淋巴管瘤中的表達(dá)與性別關(guān)系56例小兒頸部囊狀淋巴管瘤患者中，P

8、CNA陽性10例(10/56)，其中男7例(7/56)，女4例(4/56)。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析男女之間無差異顯著性(P＞0.05)。 (4)PCNA在小兒頸部囊狀淋巴管瘤和正常淋巴管中表達(dá)的比較16例正常淋巴管組織中無PCNA陽性表達(dá)。56例小兒頸部囊狀淋巴管瘤中PCNA陽性表達(dá)10例(10/56)。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，其結(jié)果表明PCNA在小兒頸部囊狀淋巴管瘤、正常淋巴管組織兩組中陽性表達(dá)率無差異顯著性(P＞0.05)。 (5)PC

9、NA增殖指數(shù)在囊狀淋巴管瘤和正常淋巴管組織中表達(dá)的比較56例小兒頸部囊狀淋巴管瘤和16例正常淋巴管組織中PCNA增殖指數(shù)分別為25.68±4.82，22.51±2.45；經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析其結(jié)果表明PCNA增殖指數(shù)在兩組中陽性表達(dá)無差異顯著性(P＞0.05)。 (6)小兒頸部囊狀淋巴管瘤和正常淋巴管組織二倍體、異倍體比較56例小兒頸部囊狀淋巴管瘤中二倍體43例(43/56)，異倍體13例(13/56)，其中男9例，女4例；16例正常淋

10、巴管組織中二倍體13例(13/16)，異倍體3例(3/16)；經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，其結(jié)果表明二倍體、異倍體在兩組中表達(dá)無差異顯著性(P＞0.05)。小兒頸部囊狀淋巴管瘤中DNA倍體表達(dá)與性別關(guān)系，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，其結(jié)果表明男女之間無差異顯著性(P＞0.05)。 (7)SPF、PI、DI在小兒頸部囊狀淋巴管瘤和正常淋巴管中比較56例小兒頸部囊狀淋巴管瘤中SPF為27.18±6.80，PI為34.65±5.38，DI為1.03±0.192；

11、16例正常淋巴管組織中SPF為20.34±5.42，PI為23.18±6.02，DI為0.98±0.07；經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，無差異顯著性(P＞0.05)。 [結(jié)論]1.PCNA在正常淋巴管組織中無陽性表達(dá)的結(jié)果提示了可能正常淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞無明顯增生跡象或者說內(nèi)皮細(xì)胞處于靜止期，這與PCNA主要在增生期細(xì)胞內(nèi)表達(dá)是相吻合的。 2.雖然在部分小兒頸部囊狀淋巴管瘤中PCNA陽性表達(dá)、出現(xiàn)異倍體、異形顆粒，個別標(biāo)本中PI、SPF百分