哇巴因在心室肥厚發(fā)生發(fā)展過(guò)程中對(duì)心肌細(xì)胞骨架及超微結(jié)構(gòu)的影響.pdf

1、目的:
　　 探討哇巴因誘導(dǎo)心室肥厚過(guò)程中對(duì)細(xì)胞骨架及超微結(jié)構(gòu)的影響。
　　 研究方法:
　　 雄性健康S-D(Spargue-Dawley)大鼠40只隨機(jī)分為2組:哇巴因組(n=20):第一天腹腔注射哇巴因負(fù)荷量34ug/kg，次日開(kāi)始每日給予哇巴因維持量27.8ug/kg;對(duì)照組(n=20):每日腹腔注射等量生理鹽水。實(shí)驗(yàn)中兩組大鼠均自由飲水?dāng)z食，且飼養(yǎng)條件及生活壞境均相同，采用尾動(dòng)脈間接法每周測(cè)量所有大鼠收

2、縮壓(SBP)，重復(fù)測(cè)量3次取其平均值，飼養(yǎng)至第3周末及第6周末以相同方法分兩批處死大鼠。取大鼠靜脈血采用酶標(biāo)記免疫吸附測(cè)定法(ELISA)測(cè)定大鼠血漿哇巴因含量，分離左心室留取標(biāo)本后給予蘇木精-伊紅(HE)染色以觀察心肌細(xì)胞骨架及基礎(chǔ)組織病理改變，給予天狼星紅染色以測(cè)定細(xì)胞內(nèi)膠原蛋白含量，通過(guò)透射電子顯微鏡觀察心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(RT-PCR)檢測(cè)左心室心肌細(xì)胞內(nèi)Profilin-1，Desmin，PCNA

3、，TGF-β1及ET-1等因子mRNA的表達(dá)水平，采用蛋白印跡技術(shù)(Westernblot)及免疫組織化學(xué)方法(Immunohistochemisrty)檢測(cè)以上各因子蛋白水平的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 第3周末，兩組大鼠平均收縮壓(SBP)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。蘇木精-伊紅染色后觀察細(xì)胞形態(tài)組織學(xué)發(fā)現(xiàn)，哇巴因組大鼠心肌細(xì)胞出現(xiàn)輕度肥厚;天狼星紅染色結(jié)果顯示:哇巴因組大鼠心肌細(xì)胞膠原蛋白含量高于對(duì)照組;通過(guò)電子顯微鏡觀察細(xì)

4、胞超微結(jié)構(gòu)，結(jié)果顯示:與生理鹽水對(duì)照組相比，哇巴因組大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)線粒體腫脹變形，Z線斷裂或呈波浪狀，細(xì)胞核拉長(zhǎng)，核膜翻折，染色質(zhì)聚集;RT-PCR、蛋白印跡技術(shù)及免疫組織化學(xué)技術(shù)結(jié)果顯示:哇巴因組大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)Profilin-1表達(dá)升高，Desmin表達(dá)降低，而PCNA，TGF-β1及ET-1與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。第6周末，哇巴因組平均收縮壓(SBP)高于生理鹽水對(duì)照組，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。蘇木精-伊紅染色后觀察形態(tài)組織學(xué)發(fā)現(xiàn)

5、，哇巴因組大鼠心肌細(xì)胞明顯肥厚且出現(xiàn)脂肪變性;天狼星紅染色結(jié)果顯示:哇巴因組大鼠心肌細(xì)胞膠原蛋白含量顯著高于生理鹽水對(duì)照組;電子顯微鏡觀察心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，結(jié)果顯示:哇巴因組大鼠心肌細(xì)胞皺縮崩解，肌原纖維斷裂、排列混亂，Z線缺失，線粒體出現(xiàn)空泡狀結(jié)構(gòu)，線粒體嵴模糊不清，細(xì)胞核形態(tài)扭曲，核膜呈回旋狀，染色質(zhì)在核膜內(nèi)側(cè)層狀堆積。RT-PCR、蛋白質(zhì)印跡技術(shù)及免疫組織化學(xué)技術(shù)結(jié)果顯示:哇巴因組大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)骨架蛋白Profilin-1表達(dá)上調(diào)