哇巴因在心室肥厚發(fā)生發(fā)展過程中對心肌細胞骨架及超微結(jié)構(gòu)的影響.pdf

1、目的:
　　 探討哇巴因誘導心室肥厚過程中對細胞骨架及超微結(jié)構(gòu)的影響。
　　 研究方法:
　　 雄性健康S-D(Spargue-Dawley)大鼠40只隨機分為2組:哇巴因組(n=20):第一天腹腔注射哇巴因負荷量34ug/kg，次日開始每日給予哇巴因維持量27.8ug/kg;對照組(n=20):每日腹腔注射等量生理鹽水。實驗中兩組大鼠均自由飲水攝食，且飼養(yǎng)條件及生活壞境均相同，采用尾動脈間接法每周測量所有大鼠收

2、縮壓(SBP)，重復測量3次取其平均值，飼養(yǎng)至第3周末及第6周末以相同方法分兩批處死大鼠。取大鼠靜脈血采用酶標記免疫吸附測定法(ELISA)測定大鼠血漿哇巴因含量，分離左心室留取標本后給予蘇木精-伊紅(HE)染色以觀察心肌細胞骨架及基礎(chǔ)組織病理改變，給予天狼星紅染色以測定細胞內(nèi)膠原蛋白含量，通過透射電子顯微鏡觀察心肌細胞超微結(jié)構(gòu)，采用實時定量聚合酶鏈反應技術(shù)(RT-PCR)檢測左心室心肌細胞內(nèi)Profilin-1，Desmin，PCNA

3、，TGF-β1及ET-1等因子mRNA的表達水平，采用蛋白印跡技術(shù)(Westernblot)及免疫組織化學方法(Immunohistochemisrty)檢測以上各因子蛋白水平的表達。
　　 結(jié)果:
　　 第3周末，兩組大鼠平均收縮壓(SBP)水平無統(tǒng)計學差異。蘇木精-伊紅染色后觀察細胞形態(tài)組織學發(fā)現(xiàn)，哇巴因組大鼠心肌細胞出現(xiàn)輕度肥厚;天狼星紅染色結(jié)果顯示:哇巴因組大鼠心肌細胞膠原蛋白含量高于對照組;通過電子顯微鏡觀察細

4、胞超微結(jié)構(gòu)，結(jié)果顯示:與生理鹽水對照組相比，哇巴因組大鼠心肌細胞內(nèi)線粒體腫脹變形，Z線斷裂或呈波浪狀，細胞核拉長，核膜翻折，染色質(zhì)聚集;RT-PCR、蛋白印跡技術(shù)及免疫組織化學技術(shù)結(jié)果顯示:哇巴因組大鼠心肌細胞內(nèi)Profilin-1表達升高，Desmin表達降低，而PCNA，TGF-β1及ET-1與對照組相比無統(tǒng)計學差異。第6周末，哇巴因組平均收縮壓(SBP)高于生理鹽水對照組，其差異具有統(tǒng)計學意義。蘇木精-伊紅染色后觀察形態(tài)組織學發(fā)現(xiàn)

5、，哇巴因組大鼠心肌細胞明顯肥厚且出現(xiàn)脂肪變性;天狼星紅染色結(jié)果顯示:哇巴因組大鼠心肌細胞膠原蛋白含量顯著高于生理鹽水對照組;電子顯微鏡觀察心肌細胞超微結(jié)構(gòu)，結(jié)果顯示:哇巴因組大鼠心肌細胞皺縮崩解，肌原纖維斷裂、排列混亂，Z線缺失，線粒體出現(xiàn)空泡狀結(jié)構(gòu)，線粒體嵴模糊不清，細胞核形態(tài)扭曲，核膜呈回旋狀，染色質(zhì)在核膜內(nèi)側(cè)層狀堆積。RT-PCR、蛋白質(zhì)印跡技術(shù)及免疫組織化學技術(shù)結(jié)果顯示:哇巴因組大鼠心肌細胞內(nèi)骨架蛋白Profilin-1表達上調(diào)