ERK活性對(duì)哮喘大鼠CyclinD1表達(dá)的影響及調(diào)控作用.pdf

1、目的：探討細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK)對(duì)哮喘大鼠氣道CyclinD1表達(dá)的影響，ERK在調(diào)控大鼠氣道平滑肌細(xì)胞增殖中CyclinD1的作用。
　　 方法：本研究分兩部分第一部分：原代培養(yǎng)大鼠的平滑肌細(xì)胞(ASMCs)，給予ERK激動(dòng)劑表皮生長(zhǎng)因子EGF和抑制劑PD98059干預(yù)ASMCs生長(zhǎng)，依處理方式不同分為5組：(1)正常對(duì)照組；(2)哮喘對(duì)照組；(3)E組：EGF20ng/mL；(4)P+E組：PD9805910μmo

2、l/L1個(gè)小時(shí)后添加EGF20ng/ml；(5)PD組：PD9805910μmol/L。采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)氣道平滑肌細(xì)胞(ASMCs)增殖能力，流式細(xì)胞術(shù)(FCM)測(cè)定細(xì)胞周期和CyclinD1的蛋白含量，RT-PCR方法檢測(cè)CyclinD1mRNA表達(dá)水平。
　　 第二部分：原代培養(yǎng)氣道平滑肌細(xì)胞(airwaysmoothmusclecells,ASMCs)，采用正常和哮喘大鼠的第3-6代細(xì)胞，分別給予ERK激

3、動(dòng)劑表皮生長(zhǎng)因子(Epidermalgrowthfactor,EGF)和抑制劑PD98059干預(yù)ASMCs生長(zhǎng)，根據(jù)處理方式不同分別分為4組：(1)空白組；(2)E組，EGF20ng/mL；(3)P+E組，PD9805910μmol/L+EGF20ng/ml;(4)PD組，PD9805910μmol/L。采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)氣道平滑肌細(xì)胞(ASMCs)增殖能力，流式細(xì)胞術(shù)(FCM)測(cè)定細(xì)胞周期，RT-PCR方法檢測(cè)ERK1

4、/2和CyclinD1mRNA表達(dá)水平，線性相關(guān)分析評(píng)價(jià)ERK和CyclinD1表達(dá)的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 第一部分：
　　 (1)在E組、PD組與哮喘(正常)對(duì)照組比較，其S+G2/M期比例和吸光度A值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；P+E組與對(duì)哮喘對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 (2)E組、PD組的CyclinD1蛋白和CyclinD1mRNA的表達(dá)水平與哮喘(正常)對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)

5、學(xué)意義(P＜0.05)；而P+E組與哮喘空白組比較無(wú)明顯差異(P＞0.05)；在本實(shí)驗(yàn)中CyclinD1蛋白和CyclinD1mRNA的表達(dá)趨勢(shì)一致。
　　 第二部分：
　　 (1)在哮喘組內(nèi)，E組、PD組與哮喘空白組比較，其S+G2/M期比例和吸光度A值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；在正常組組內(nèi)，E組、PD組與正?？瞻捉M比較，其S+G2/M期比例和吸光度A值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；哮喘組的S+G2/M期比

6、例和吸光度A值比正常組要高。
　　 (2)在哮喘組內(nèi)，E組、PD組的ERK1/2mRNA和CyclinD1mRNA的表達(dá)水平與哮喘空白組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；正常組組內(nèi)與哮喘組組內(nèi)變化趨勢(shì)一致，哮喘組的ERK1/2mRNA和CyclinD1mRNA的表達(dá)比正常組高。
　　 (3)在mRNA水平，對(duì)大鼠ASMCsERK1/2和CyclinD1的表達(dá)采用相關(guān)分析，結(jié)果顯示ERK1/2和CyclinD1的表達(dá)

7、呈明顯正相關(guān)(r=0.565，P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 (1)ERK活性促進(jìn)哮喘大鼠ASMCs的增殖，同時(shí)使CyclinD1在哮喘平滑肌細(xì)胞中的表達(dá)增加，提示ERK活性的改變直接影響了CyclinD1在大鼠氣道的表達(dá)，進(jìn)而影響氣道重塑的形成，為闡明哮喘的發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 (2)ERK能促進(jìn)正常大鼠和哮喘大鼠ASMCs增殖，CyclinD1參與了正常和哮喘大鼠ASMCs的增殖，ERK1/2和