胃癌患者貧血情況調查及缺氧與不良預后的機制研究.pdf

1、第一部分胃癌術后輔助化療前貧血發(fā)生情況調查 目的:探討胃癌術后輔助化療前貧血發(fā)生的危險因素，進而了解胃癌術后輔助化療前貧血的臨床特點和發(fā)病規(guī)律，為胃癌術后輔助化療前貧血的防治提供臨床資料。 方法:回顧性分析2005年1月-2008年12月東南大學附屬中大醫(yī)院住院接受輔助化療胃癌患者臨床資料。收集并詳細記錄患者的一般情況及腫瘤疾病治療轉歸資料，統計輔助化療前貧血的發(fā)生率及貧血的發(fā)病程度，從單因素、多因素兩個層面針對年齡、性

2、別、病理分期、手術術式、病理組織類型、血清白蛋白水平等諸方面對貧血發(fā)生發(fā)展的影響進行統計學分析。 結果:232例胃癌術后輔助化療前患者，貧血發(fā)生率53．4％。單因素分析：年齡不小于60歲者貧血構成比顯著高于年齡小于60歲的患者。女性患者貧血構成比顯著高于男性患者。Ⅲ、Ⅳ期患者的貧血構成比明顯高于Ⅰ、Ⅱ期患者。全胃切除術患者的貧血構成比顯著高于遠端胃次全切除術和近端胃次全切除術患者。血清白蛋白水平低于35g/L的患者貧血發(fā)生率明顯

3、高于不低于35g/L的患者。Logistic多因素逐步回歸分析表明年齡（比數比（OR）26．422，95％可信區(qū)間（CI）5．716～122．129）、血清白蛋白（OR4．987，95％CI1．840～13．514）、病理分期（OR4．590，95％CI1．488～14．163）、手術方式（OR9．440，95％CI2．313～38．535）是胃癌術后輔助化療前患者合并貧血的獨立危險因素。 結論:本研究提示胃癌輔助化療前貧血的發(fā)

4、生與年齡、血清白蛋白、手術方式、分期等因素有相關性。高齡、營養(yǎng)不良、全胃切除、中晚期患者更易發(fā)生貧血。 第二部分人胃癌細胞株SGC7901體外乏氧環(huán)境HIF-1α、VEGF-A、VEGF-D基因表達變化 目的:觀察缺氧干預對人胃癌細胞SGC7901缺氧誘導因子-1a（HIF-1a）、血管內皮生長因子-A（VEGF-A）和血管內皮生長因子-D（VEGF-D）表達的影響。 方法:體外培養(yǎng)人胃癌細胞SGC7901（37

5、℃，5％CO2，21％O2，74％N）。將SGC7901細胞分成乏氧0、4、16、24小時四組。將人胃癌細胞SGC7901乏氧干預0小時、4小時、16小時、24小時。以反轉錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）方法檢測四組HIF-1α、VEGF-A、VEGF-DmRNA的表達情況：免疫印跡（Western Blot）檢測四組HIF-1α、VEGF-A、VEGF-D蛋白表達情況。 結果:0小時、4小時、16小時、24小時HIF-1α

6、mRNA表達分別0．46±0．03、0．36±0．02、0．61±0．05、0．82±0．07；與0小時相比，4小時組HIF-1α mRNA轉錄處于下降水平，16小時組HIF-1α mRNA轉錄上升，24小時組轉錄達到最高水平。0小時組、4小時組、16小時、24小時VEGF-AmRNA表達分別是0．27±0．03、0．39±0．02、0．47±0．03、0．68±0．05；VEGF-DmRNA表達量分別0．31±0．02、0．42±0．

7、04、0．54±0．04、0．72±0．06；VEGF-AmRNA和VEGF-DmRNA表達量均隨時間的延長逐漸增加。 0小時、4小時、16小時、24小時HIF-1α蛋白表達分別0．27±0．02、0．37±0．03、0．53±0．03、0．86±0．07；VEGF-A蛋白表達分別0．24±0．02、0．34±0．01、0．49±0．03、0．96±0．07；VEGF-D蛋白表達分別0．23±0．01、0．32±0．02、0．5

8、6±0．05、0．77±0．06；HIF-1α、VEGF-A、VEGF-D蛋白表達量隨乏氧時間的延長逐漸增加。 結論:胃癌細胞株SGC7901缺氧環(huán)境中，HIF-1α、VEGF-A、VEGF-DmRNA和蛋白表達均明顯增加。 第三部分苦參堿聯合CL體外干預人胃癌細胞SGC7901上清液培養(yǎng)血管內皮細胞ECV-304的增殖與凋亡 目的：研究苦參堿聯合中藥刺梨提取物CL體外對人胃癌細胞SGC-7901上清液培養(yǎng)的人臍

9、靜脈內皮細胞ECV-304增殖及凋亡的影響，探討其機制。 方法：體外培養(yǎng)人胃癌細胞SGC7901細胞和人臍靜脈內皮細胞ECV-304兩種細胞。收集人胃癌細胞SGC7901細胞培養(yǎng)上清液，抽濾后用DMEM培養(yǎng)液配成含6．25％、12．5％、25％、50％4個濃度組，分別干預人臍靜脈內皮細胞ECV-304，以四甲基偶氮唑藍（MTT）比色法檢測上清液對細胞增殖的刺激作用，選用最佳濃度對人臍靜脈內皮細胞ECV-304細胞培養(yǎng)：培養(yǎng)液中加

10、入苦參堿干預ECV-304，分為15μg/mL、30μg/mE、60μg/mE、120μg/mL、240μg/mL五個濃度，分別作用24小時、48小時、72小時，以MTT法測定苦參堿對ECV-304細胞增殖的抑制情況。培養(yǎng)液中加入CL干預ECV-304，分為10μg/mL、20μg/mL、40μg/mE、80μg/mE、160μg/mE五個濃度，分別作用24小時、48小時、72小時，以MTT法測定CL對ECV-304細胞增殖的抑制情況；

11、培養(yǎng)液中加入苦參堿聯合CL干預ECV-304，分為10μg/mL+15μg/mL、20μg/mL+30μg/mL、40μg/mL+60μg/mL、80μg/mL+120μg/mL、160μg/mL+240μg/mL五個濃度，作用48小時，以MTT法測定苦參堿聯合CL對ECV-304細胞增殖的抑制情況；根據中效原理法判斷聯合用藥的相互作用；以RT-PCR法檢測Ki-67、Bcl-2、BaxmRNA的表達情況；以Western blot法檢

12、測Ki-67、Bcl-2、Bax蛋白表達情況。 結果： 1． MTT法檢測顯示：（1）SGC-7901上清液（6．25％、12．5％、25％、50％）干預ECV-304細胞后，吸光度值均高于空白對照組；（2）苦參堿（15μg/mL、30μg/mL、60μg/mL、120μg/mL、240μg/mL）干預SGC-7901上清液培養(yǎng)ECV-304細胞，在24小時、48小時、72小時，吸光度值均低于空白對照組，且呈劑量依賴性；

13、（3）CL（10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL）干預SGC-7901上清液培養(yǎng)ECV-304細胞，在24小時、48小時、72小時，吸光度值均低于空白對照組，且呈劑量依賴性；（4）苦參堿聯合CL（10μg/mL+15μg/mE、20μg/mL+30μg/mL、40μg/mL+60μg/mE、80μg/mL+120μg/mE、160μg/mE+240μg/mE）干預SGC-7901上清液培養(yǎng)EC

14、V-304細胞，在48小時，吸光度值均低于空白對照組，且呈劑量依賴性：（5）IC50濃度（70μg/mL）的苦參堿、IC50CL（75μg/mL）和1/2IC50苦參堿（35μg/mE）+1/2IC50（37．5μg/mE）CL干預SGC-7901上清液培養(yǎng)ECV-304細胞，在48小時，聯合用藥組的吸光度值低于單獨用藥組。 2．中效原理計算得出：fa=0．81時兩藥合用指數CI=1，為相加效應，fa<0．81時，兩藥合用指數C

15、I<1，為協同效應，fa>0．81時，CI>1為拮抗效應。 3． RT-PCR檢測顯示：以苦參堿（70μg/mE）、CL（75μg/mL）和苦參堿（37．5μg/mL）聯合CL（37．5μg/mE）干預SGC-7901上清液培養(yǎng)ECV-304細胞48小時，聯合組的Ki-67mRNA和Bcl-2mRNA表達量明顯低于單藥組，BaxmRNA表達量明顯高于單藥組。 4． Western Blot檢測顯示：以苦參堿（75μg/m

16、L）、CL（75μg/mL）和苦參堿（37．5μg/mL）聯合CL（37．5μg/mL）干預SGC-7901上清液培養(yǎng)ECV-304細胞48小時，聯合組的Ki-67蛋白和Bcl-2蛋白表達量明顯低于單藥組，Bax蛋白表達量明顯高于單藥組。 結論:SGC-7901上清液（6．25％、12．5％、25％、50％）干預ECV-304細胞后，均促進了ECV-304細胞的增殖；低濃度苦參堿聯合CL應用與兩藥高濃度單獨應用相比，對人胃癌細胞