NF-κB、TNF-α和小膠質(zhì)細(xì)胞在無(wú)創(chuàng)肢體缺血后處理腦保護(hù)中的作用.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)在建立大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型基礎(chǔ)上，研究NF-κB、TNF-α和小膠質(zhì)細(xì)胞在無(wú)創(chuàng)性遠(yuǎn)端肢體缺血后處理腦保護(hù)機(jī)制中的作用。
　　方法：健康雄性SD大鼠，體重250～300g，隨機(jī)分為3組(eachn=15):假手術(shù)組（Sham組）、缺血再灌注組（I/R組）和無(wú)創(chuàng)遠(yuǎn)端缺血后處理組(NRIPoC組)。I/R組參照Longa制作MCAO模型方法制備局灶性腦缺血再灌注損傷模型，阻斷大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈90min后施行再灌注

2、。Sham組除不插入栓線外，其他手術(shù)操作步驟同I/R組。NRIPoC組建立局灶性腦缺血再灌注損傷模型方法同I/R組，在大腦中動(dòng)脈再灌注后立即行右側(cè)下肢加壓缺血5min/再灌注5min共3次循環(huán)后持續(xù)恢復(fù)右下肢血流。I/R組和NRIPoC組于大腦中動(dòng)脈再灌注后24h，Sham組于手術(shù)完成后24h分別對(duì)各組大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能障礙評(píng)分，評(píng)分后處死大鼠，進(jìn)行TTC染色測(cè)定腦梗死容積; HE染色及Nissl染色分別觀察缺血半影區(qū)腦組織細(xì)胞形態(tài)及神經(jīng)

3、細(xì)胞存活情況。采用Iba1標(biāo)記小膠質(zhì)細(xì)胞，免疫組化法觀察小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)和數(shù)量的變化。免疫組化和Western blot法測(cè)定NF-κB、TNF-α的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠腦缺血再灌注24h后，NRIPoC組腦梗死容積比I/R組腦梗死容積顯著減小(P＜0.05)。
　　2.HE染色和Nissl染色:HE染色顯示I/R組和NRIPoC組腦缺血中心區(qū)均出現(xiàn)細(xì)胞壞死，腦缺血半影區(qū)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目減少，體積減小，核固縮，染

4、色質(zhì)濃縮、邊聚。而NRIPoC組細(xì)胞損傷程度較I/R組減輕。NRIPoC組尼氏體數(shù)量較I/R組顯著增加(P＜0.05)。
　　3.缺血半影區(qū)NF-κB和TNF-α表達(dá):與Sham組相比，I/R組和NRIPoC組缺血半影區(qū)NF-κB和TNF-α表達(dá)免疫組化法及Western blot法均顯著升高(P＜0.05)，但NRIPoC組NF-κB和TNF-α表達(dá)較I/R組表達(dá)降低(P＜0.05)。
　　4.小膠質(zhì)細(xì)胞:與Sham組相比

5、，I/R組和NRIPoC組小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目顯著增加(P＜0.05)。NRIPoC組小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目比I/R組增加(P＜0.05)。
　　5.腦缺血再灌注24h后，NRIPoC組神經(jīng)功能障礙評(píng)分中位數(shù)較I/R組下降，但I(xiàn)/R組和NRIPoC組神經(jīng)功能障礙評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.無(wú)創(chuàng)性遠(yuǎn)端肢體缺血后處理的腦保護(hù)機(jī)制可能與降低NF-κB和TNF-α表達(dá)，減輕腦內(nèi)炎癥反應(yīng)有關(guān)。
　　2.小