黑木耳栽培菌株親緣關(guān)系的RAPD分析.pdf

1、黑木耳Auricularia auricula(L. ex Hook.)在分類學上隸屬于真菌界、擔子菌綱、木耳科、木耳屬，是一種具有很高的食、藥用價值的食用菌。黑木耳是我國傳統(tǒng)的出口商品，我國黑木耳產(chǎn)量占全世界96％以上。目前我國黑木耳菌種市場混亂、菌種管理滯后，亂引種、命名現(xiàn)象較普遍，本研究利用RAPD技術(shù)對40份不同地區(qū)栽培的黑木耳菌種的遺傳多樣性和親緣關(guān)系進行分析、鑒別黑木耳菌株間的親緣關(guān)系遠近，為黑木耳菌株的鑒定和種質(zhì)資源的評價

2、提供科學依據(jù)。結(jié)果如下：
　　采用 CTAB法快速提取到了較高質(zhì)量黑木耳基因組總 DNA用于 RAPD擴增。從148個隨機引物中篩選出11個可穩(wěn)定擴增的引物，用這些引物對四十個黑木耳菌株進行RAPD分析，結(jié)果表明，11個引物共擴增出76條帶，多態(tài)性條帶為59條，多態(tài)性的頻率為77.63％，多態(tài)性比率較高。
　　確定了RAPD-PCR黑木耳最適25μl反應體系為：模板DNA濃度為15ng·μL-1，Mg2+濃度為2.0 mmo

3、l·L-1，TaqDNA聚合酶1U，dNTPs的濃度為150μmol·L-1，10堿基引物濃度為10 pmol，10×緩沖液濃度為2.5 mmol·L-1，其余用重蒸餾水補充。擴增程序為：94℃預變性5 min，94℃變性1 min，36℃復性1 min，72℃延伸1.5min，共40個循環(huán)；最終72℃延伸7 min。
　　采用UPGMA系統(tǒng)聚類法，聚類分析結(jié)果表明，在遺傳距離0.27水平下，可將供試菌株劃分為四大類：哈爾濱微生物