PPARs對(duì)菰米和復(fù)配式粗雜糧改善脂質(zhì)毒性的作用以及對(duì)脂代謝調(diào)控機(jī)制的研究.pdf

1、目的：（1）對(duì)比研究中國和北美菰米對(duì)脂代謝的調(diào)節(jié)作用，探討過氧化物酶體增殖體受體（PPARs）通路在菰米改善脂質(zhì)毒性中的作用和相關(guān)機(jī)制，為中國和北美菰資源的利用提供理論依據(jù)。（2）觀察脂肪酸類型和膽固醇水平對(duì)雌雄小鼠的脂代謝的作用，PPARs在脂肪、膽固醇代謝以及脂代謝性別差異中與其他轉(zhuǎn)錄因子的交互作用和相關(guān)機(jī)制，為進(jìn)一步揭示小腸調(diào)控脂代謝的生理功能和脂肪酸代謝的分子機(jī)制提供依據(jù)。（3）觀察由粗雜糧營養(yǎng)膳食干預(yù)、健康教育和定期體檢組成的

2、復(fù)配式營養(yǎng)膳食干預(yù)對(duì)血脂異常人群形態(tài)學(xué)和血生化指標(biāo)的影響，評(píng)價(jià)復(fù)配式營養(yǎng)膳食干預(yù)效果。（4）探討PPARγ2基因多態(tài)性對(duì)復(fù)配式營養(yǎng)膳食干預(yù)效果的影響，為血脂異常人群制定個(gè)體化干預(yù)措施提供理論依據(jù)。
　　 方法：（1）55只SD大鼠隨機(jī)分為高脂模型對(duì)照組、米面組、北美菰米組、中國菰米組和陰性對(duì)照組，連續(xù)喂養(yǎng)8周后，測定大鼠形態(tài)學(xué)、血脂、血糖、脂蛋白酯酶（LPL）、抗氧化能力、炎性因子水平及瘦素（Leptin），并檢測肝臟組織病理學(xué)

3、的改變。（2）運(yùn)用半定量RT-PCR技術(shù)測定大鼠肝臟組織PPARα及其相關(guān)基因mRNA的表達(dá)；測定大鼠脂肪組織PPARγ及其相關(guān)基因mRNA的表達(dá)。（3）60只C57BL/6J小鼠（雌性各半），隨機(jī)分為低脂對(duì)照組（Chow）、低脂對(duì)照組+1％膽固醇組（Chow+C）、高多不飽和脂肪酸組（PUFA）、高多不飽和脂肪酸+1％膽固醇組（PUFA+C）、高單不飽和脂肪酸組（MUFA）和高單不飽和脂肪酸+1％膽固醇組（MUFA+C），連續(xù)喂養(yǎng)三周

4、，測定各組小鼠體重、臟體比，血糖、血清總膽固醇（TC）和甘油三酯（TG）。（4）運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR法檢測小鼠小腸不同部分以及肝臟的PPARα、LXRα、SREBP1-c及其靶基因的mRNA的表達(dá)；運(yùn)用Western Blotting方法觀察肝臟PPARα、LXRα、SREBP1-c蛋白的表達(dá)。（5）采用多階段分層整群隨機(jī)抽樣的方法進(jìn)行基線體檢調(diào)查后，在基線體檢人群中選出血脂異常人群，并將其分為復(fù)配式營養(yǎng)膳食干預(yù)組與對(duì)照組，比較兩組人群干

5、預(yù)前后形態(tài)學(xué)指標(biāo)、一般血生化指標(biāo)。（6）采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）方法對(duì)復(fù)配式營養(yǎng)干預(yù)組所有研究對(duì)象進(jìn)行基因型檢測，比較PPARγ2基因Prol2/Alal2不同基因型對(duì)粗雜糧膳食干預(yù)的影響。
　　 結(jié)果：（1）與米面組和高脂模型對(duì)照組相比，中國和北美菰米降低脂代謝紊亂大鼠體重、脂體比、血糖、血脂和炎性因子的水平（P<0.05），提高大鼠抗氧化能力（P<0.05），同時(shí)中國和北美菰米組大鼠肝臟脂肪

6、變性程度顯著減輕。（2）與米面組和高脂模型對(duì)照組相比，中國和北美菰米組大鼠肝臟PPARα、HMG-CoA還原酶、脂肪酸結(jié)合蛋白2（FABP-2）、CYP7A1 mRNA的表達(dá)顯著升高（P<0.05）：大鼠脂肪組織的PPARγ mRNA的表達(dá)顯著升高，而TNF-α和瘦素mRNA的表達(dá)明顯降低。（3）高脂膳食MUFA能夠增加雄性小鼠的TG水平，而PUFA輕微降低雄性小鼠的TG水平，高脂膳食對(duì)雌性小鼠的TG變化影響不大；高脂膳食PUFA和MU

7、FA能夠增加雌雄小鼠的TC水平。添加1％膽固醇后，高脂膳食添加膽固醇后僅增加雄性小鼠的血TG濃度（p>0.05），PUFA在添加1％膽固醇后，雌雄性小鼠的TC濃度都呈降低趨勢；MUFA添加1％膽固醇后，在雄性小鼠TC濃度下降，而雌性小鼠，TC濃度升高（4）經(jīng)qPCR分析發(fā)現(xiàn)，PUFA組小鼠肝臟PPARα的mRNA的表達(dá)顯著上升，高于MUFA組（p<0.05），LXRα和SREBP1-c的mRNA表達(dá)降低，同時(shí)PUFA和PUFA+C組能夠

8、明顯的改善小腸組織的脂代謝關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子mRNA的表達(dá)。添加1％的膽固醇后，LXRα和SREBP1-c的基因表達(dá)水平被激活，而PPARα被抑制。Western blotting蛋白表達(dá)分析顯示，PUFA組的PPARα的蛋白表達(dá)上升，高于MUFA組，LXRα和SREBP1-c的蛋白表達(dá)水平下降。在添加1％的膽固醇后，LXRα和SREBP1-c蛋白表達(dá)略有上升，而PPARα被抑制。（5）經(jīng)過一年的復(fù)配式營養(yǎng)干預(yù)，干預(yù)組人群BMI、WHR平均水

9、平明顯下降，其血脂水平、血糖和血壓也較試驗(yàn)前明顯下降（P<0.05）。（6）血脂異常人群中PPARγ2基因Prol2/Alal2三種基因型中以PP基因型為主，其次為PA型和AA型，分別占89.62％、9.91％和0.47％，不同基因型中PA型血脂異常人群對(duì)復(fù)配式營養(yǎng)膳食干預(yù)最敏感。
　　 結(jié)論：（1）中國和北美菰米都能改善高脂/高膽固醇膳食引起的大鼠肝臟脂質(zhì)毒性。其可能的機(jī)制是，通過活化PPARα和PPARγ，激活其靶基因和蛋白

10、表達(dá)，改善脂質(zhì)代謝關(guān)鍵酶的活性，增加脂肪酸的氧化，降低FFAs和甘油三酯的生物合成，抑制脂肪因子和炎性因子的分泌，抑制大鼠氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化損傷，從而緩解由于高脂/高膽固醇膳食誘導(dǎo)的大鼠肝臟的脂質(zhì)毒性。（2）脂肪酸類型、膽固醇和性別都能夠影響脂肪和膽固醇代謝的穩(wěn)態(tài)，其可能的機(jī)制是，肝臟和小腸以PPARα為核心的脂代謝關(guān)鍵核轉(zhuǎn)錄因子基因和蛋白表達(dá)，能夠被膳食脂肪酸和膽固醇調(diào)控，同時(shí)核轉(zhuǎn)錄因子間的相互作用以及與雌激素受體間的相互作用，最終