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文檔簡介
1、背景與目的:動脈粥樣硬化(Atherosclerosis,As)是發(fā)生在大、中等動脈的一種病理變化,是引起心腦血管疾病最常見的病因。目前認(rèn)為其形成與巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積有關(guān),但具體機(jī)制仍不十分清楚。近年來發(fā)現(xiàn)組織蛋白酶L(CathepsinL)通過調(diào)控細(xì)胞遷移、增殖、凋亡、以及細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝參與動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。本實驗擬檢測Cathepsin L在AS中的表達(dá)以及對巨噬細(xì)胞脂質(zhì)蓄積的影響。
方法:采用頸總動脈套環(huán)以及高脂飲
2、食建立兔頸總動脈粥樣硬化模型,HE染色檢測頸總動脈病變,油紅O染色觀察斑塊內(nèi)脂質(zhì)的蓄積,免疫組織化學(xué)的方法檢測斑塊內(nèi)Cathepsin L的表達(dá)。在此基礎(chǔ)上,采用不同濃度的ox-LDL孵育RAW264.7巨噬細(xì)胞24小時,RT-PCR檢測巨噬細(xì)胞中Cathepsin L mRNA的表達(dá), Western blot檢測Cathepsin L蛋白的表達(dá),熒光分光光度計檢測Cathepsin L的活性的變化。然后采用不同濃度的Cathepsi
3、n L inhibitor預(yù)處理巨噬細(xì)胞,再加入ox-LDL致終濃度為50μg/ml,油紅O染色以及HPLC觀察各組細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積。
結(jié)果:兔頸總動脈套環(huán)并飼以高脂飲食4周后,形成明顯的動脈粥樣硬化病變,斑塊內(nèi)有大量的脂質(zhì)蓄積;兔正常血管中幾乎無Cathepsin L表達(dá),而AS斑塊內(nèi)高表達(dá);不同濃度ox-LDL孵育巨噬細(xì)胞24h后,Cathepsin L mRNA表達(dá)量在各組間無明顯差異(p>0.05),但蛋白表達(dá)量以及活性
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