表皮葡萄球菌細胞間粘附素基因功能及表達調(diào)控的研究.pdf

1、該文以對生物膜陰性的表皮葡萄球菌ATCC1228進行全基因組測序為基礎,通過其與金黃色葡萄球菌N315,生物膜陽性表皮葡萄球菌RP62A進行全基因組比較,分析了表皮葡萄球菌生物膜相關基因,重點研究了細胞間粘附素基因(ica)的功能,并對其表達調(diào)節(jié)進行了初步研究.通過對金黃色葡萄球菌與表皮葡萄球菌的全基因組比較,發(fā)現(xiàn)表皮葡萄球菌缺乏一系列編碼毒素和侵襲性胞外酶的基因,從遺傳物質(zhì)水平解釋了金葡菌和表葡菌致病能力和致病機制的差異.比較生物膜陰

2、性表葡菌株ATCC 12228和生物膜陽性菌株RP62A全基因組序列,發(fā)現(xiàn)二者高度相似,但在ATCC 12228基因組中ica基因座(ica locus)完全缺失.為驗證ica基因與生物膜形成的關系,采用基因轉入的方法研究了ica基因轉入對ica陰性菌株ATCC 12228,HB及TU3298生物膜形成的影響.半定量生物膜形成實驗表明ica基因轉入使得三株生物膜陰性菌株均轉變?yōu)樯锬り栃?掃描電子顯微鏡結果也從形態(tài)上證產(chǎn)ica轉化前后菌

3、株生物膜形成的差異.醫(yī)院來源菌株HB轉入ica后其生物膜形成明顯高于共生性表葡ATCC 12228和TU3298菌株ica基因轉化菌株的生物膜形成.為闡明ica基因?qū)采员砥暇虏×Φ挠绊?以完成全基因組測序的ATCC 12228為研究對象進行了動物實驗.大鼠中心靜脈插管感染實驗顯示,與ATCC 12228相比,ica基因轉入后細菌引起實驗動物感染率明顯增高,從被感染動物每克肝臟,腎臟和心臟組織中檢測到的細菌數(shù)遠遠高于ATCC 122

4、28細菌攻擊組動物相應組織中細菌檢出數(shù).以上結果提示獲得ica基因可能是共生性表葡菌轉化為侵襲性表葡菌的關鍵因素之一.ica基因在表皮葡萄菌生物膜形成和致病過程中具有重要作用,但生物膜形成還與環(huán)境因素有關.為研究ica基因的表達調(diào)控及受環(huán)境因素的影響,以熒光素酶基因為報告基因構建了ica啟動子活性檢測系統(tǒng).應用該系統(tǒng)通過檢測細菌使熒光素底物產(chǎn)生化學發(fā)光的程度來反應ica的表達情況,可用于分析ica的表達調(diào)節(jié)及其機制的研究.實驗結果顯示i