肺癌患者表皮生長因子受體基因啟動子甲基化研究.pdf

1、研究背景：
　　肺癌是全世界目前死亡率最高的惡性腫瘤，是我國惡性腫瘤病人死亡的首要原因，占全部惡性腫瘤死亡的22.7％，且發(fā)病率和死亡率仍在迅速上升，多數(shù)患者在確診時已為中晚期，其中晚期非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）患者超過50％，這些病人失去手術(shù)機(jī)會，因此，大多數(shù)肺癌患者需要接受化療，一線化療方案為鉑類為基礎(chǔ)的兩藥聯(lián)合方案，晚期NSCLC的治療已有重大進(jìn)展，但仍然存在預(yù)后差、生存期短等問題。以表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑(EGF

2、R-TKI)為基礎(chǔ)的分子靶向藥物治療在肺癌的治療中發(fā)揮著重要作用，成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。EGFR高表達(dá)是應(yīng)用EGFR-TKI的基礎(chǔ)，TKI的療效與EGFR突變密切相關(guān)，突變中85％-90％是外顯子19的缺失突變和外顯子21的點(diǎn)突變。EGFR基因突變的非小細(xì)胞肺癌患者對TKI治療有效率可以達(dá)到75％，但仍有部分發(fā)生突變的患者在應(yīng)用EGFR-TKI6-12個月后發(fā)生耐藥，其機(jī)理尚不完全清楚。隨著表觀遺傳學(xué)研究的進(jìn)一步深入，人們發(fā)現(xiàn)DNA甲基

3、化與腫瘤的發(fā)生發(fā)展和治療有密切關(guān)系，會導(dǎo)致抑癌基因和癌基因沉默，甲基化不改變DNA序列且具有可逆性，所以也成為腫瘤治療的新靶點(diǎn)。EGFR基因5′調(diào)控區(qū)啟動子有一個富含GC的CpG島,在部分實體瘤病人中EGFR基因CpG島表現(xiàn)為高甲基化狀態(tài)，這部分病人EGFR低表達(dá)甚至不表達(dá)。
　　研究目的：
　　本實驗通過檢測肺癌組織中EGFR啟動子的甲基化狀態(tài)，探討其與肺癌臨床特征、EGFR突變的相關(guān)性，為肺癌的靶向藥物治療提供進(jìn)一步理論

4、依據(jù)。
　　研究方法：
　　應(yīng)用DNA提取試劑盒提取肺癌患者手術(shù)樣本的基因組DNA，經(jīng)過DNA亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)變后回收產(chǎn)物，未發(fā)生甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，發(fā)生了甲基化的胞嘧啶保持不變。回收的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序分析，由于測序所得結(jié)果覆蓋的目的片段較短，不能從整體上反映啟動子整體的甲基化狀態(tài)，應(yīng)用熒光偏振檢測技術(shù)對EGFR啟動子甲基狀態(tài)進(jìn)行進(jìn)一步檢測，將兩部分檢測結(jié)果相結(jié)合，分析EGFR甲基化狀態(tài)與肺癌患者臨

5、床特征和EGFR突變的相關(guān)性。
　　研究結(jié)果：
　　第一部分實驗收集的76例肺癌組織中有23例檢測到EGFR基因啟動子甲基化，甲基化率為30.3％，甲基化狀態(tài)與肺癌患者的性別、年齡、吸煙史、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤程度和TNM分期無明顯相關(guān)，與病理類型相關(guān)，鱗癌患者的甲基化率明顯高于腺癌患者，吸煙者發(fā)生EGFR甲基化的危險度比不吸煙者高1.88倍。第二部分實驗結(jié)果顯示，EGFR基因啟動子甲基化與突變狀態(tài)也有密切關(guān)系，發(fā)生19、21外