TLR9在CHB患者PBMCs中的表達(dá)及CpG-ODN對TLR9調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、目的：通過測定慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血單個核細(xì)胞(PBMCs)中病毒核酸識別受體-TLR9(TLR9)的表達(dá)情況，了解HBV感染與TLR9的相關(guān)關(guān)系，并通過CpG寡脫氧核苷酸(CpG-ODN)對CHB患者PBMCs中TLR9調(diào)節(jié)作用的研究，探討是否可以通過CpG-ODN對CHB患者PBMCs中TLR9表達(dá)的調(diào)節(jié)，起到抵抗HBV感染的作用，為今后抗HBV感染有效藥物的篩選提供實(shí)驗(yàn)平臺。 方法：(1)收集入院治療的CHB患者

2、，檢測乙肝兩對半和HBV DNA拷貝數(shù)，據(jù)測定結(jié)果設(shè)實(shí)驗(yàn)組(CHB患者組)，對照組(健康志愿者組)。采用OptiprepTM(混合法)分離實(shí)驗(yàn)對象PBMCs，RT-PCR法檢測PBMCs中TLR9 mRNA的表達(dá)情況。(2) CpG-ODN分別對CHB患者和健康志愿者PBMCs進(jìn)行體外刺激，以1640培養(yǎng)基為非刺激空白對照。通過RT-PCR方法檢測刺激前后TLR9mRNA的表達(dá)情況；ELISA方法檢測PBMCs培養(yǎng)上清中IFN-α的濃度

3、；細(xì)胞組織化學(xué)方法檢測刺激前后TLR9蛋白水平的表達(dá)情況。 結(jié)果：(1) CHB患者PBMCs中TLR9的表達(dá)情況：RT-PCR結(jié)果顯示CHB患者組TLR9在PBMCs中的表達(dá)明顯低于健康對照組(P<0.01)；(2)CpG-ODN體外刺激PBMCs后TLR9的表達(dá)情況：RT-PCR結(jié)果證明，CpG-ODN刺激后CHB患者和健康志愿者PBMCs TLR9 mRNA的表達(dá)均明顯高于其各自的1640空白對照組(P<0.01，P<0.

4、01)；但是，CpG-ODN體外刺激后，CHB患者CpG-ODN刺激組TLR9 mRNA的表達(dá)仍低于健康志愿者1640空白對照組(P<0.01)；(3) CpG-ODN體外刺激PBMCs后IFN-α的分泌情況：CpG-ODN體外刺激后，CHB患者和健康志愿者PBMCs分泌IFN-α的水平分別與其各自的1640空白對照組相比較有明顯增加(P<0.01，P<0.01)；但是CpG-ODN刺激后，CHB患者PBMCs分泌IFN-α的水平低于健

5、康志愿者(P<0.01)；(4) PBMCs中TLR9 mRNA的表達(dá)與培養(yǎng)上清中IFN-α含量的相關(guān)性分析：PBMCs中TLR9mRNA的表達(dá)與培養(yǎng)上清中IFN-α的含量呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.686(P<0.01)；(5)細(xì)胞免疫化學(xué)結(jié)果證明，CpG-ODN刺激后CHB患者和健康志愿者PBMCs胞漿中TLR9的受體表達(dá)陽性率均有所升高。 結(jié)論：CHB患者PBMCs中TLR9表達(dá)顯著低于健康對照，提示CHB患者PBMCs識別H