TLR4與TLR9介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路在炎癥性腸病中的作用研究.pdf

1、目的：炎癥性腸病(Inflammatory bowel disease,IBD)包括潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis,UC)和克羅恩病(Crohn disease,CD)。近年來(lái)該病的發(fā)病率有逐漸增高的趨勢(shì),其病因和發(fā)病機(jī)制涉及遺傳、環(huán)境、免疫、感染等因素,但至今尚未闡明。新近研究發(fā)現(xiàn)Toll樣受體(Toll—like receptors,TLRs)是參與非特異性免疫的一類重要分子,也是連接非特異性免疫和特異性免疫的重

2、要橋梁。Toll樣受體屬于高度保守的Ⅰ型跨膜蛋白(typeⅠtransmembrance protein),能識(shí)別病原相關(guān)分子模式(pathogen associatedmolecular patterns,PAMPs),通過髓樣分化因子88(myeloid differentiationfactor88,MyD88)-核因子κB(nuclear factor—κB,NF-κB)等多條信號(hào)途徑,啟動(dòng)細(xì)胞活化進(jìn)程,上調(diào)主要組織相容性復(fù)合物

3、(major histocompatibilitycomplex,MHC)和共刺激分子表達(dá),分泌細(xì)胞因子等,從而進(jìn)一步誘導(dǎo)炎癥免疫反應(yīng),同時(shí)活化的TLRs也能激活T細(xì)胞,啟動(dòng)獲得性免疫反應(yīng)。本課題利用葡聚糖硫酸鈉(dextran sulfate sodium,DSS)結(jié)腸炎模型研究結(jié)腸炎小鼠腸黏膜組織中TLR4、TLR9與NF-κB及促炎癥細(xì)胞因子TNF-α的表達(dá)以及相互關(guān)系,探討TLR4、TLR9信號(hào)途徑在實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎中的作用。

4、>　　 方法：建立小鼠葡聚糖硫酸鈉結(jié)腸炎模型,進(jìn)行大體和組織病理學(xué)評(píng)價(jià):6-8周齡健康雄性Balb／c小鼠分為兩組:A組(正常對(duì)照組,n=5):蒸餾水自由飲用7天。B組(DSS急性結(jié)腸炎組,n=15):5％DSS溶液自由飲用7天。造模7天后處死小鼠,免疫組化方法檢測(cè)小鼠結(jié)腸黏膜TLR4、TLR9、NF-κB、TNF-α蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：1.小鼠葡聚糖硫酸鈉結(jié)腸炎造模成功,小鼠結(jié)腸黏膜有明顯的肉眼和組織學(xué)炎癥。2.免疫組化

5、檢測(cè)到TLR4和TLR9在B組小鼠結(jié)腸黏膜表達(dá)顯著高于A組(P<0.05)；NF-κB在B組結(jié)腸黏膜表達(dá)顯著高于A組(P<0.05),TNF-α蛋白在B組結(jié)腸黏膜表達(dá)顯著高于A組(P<0.05),TLR4與NF-κB、TNF-α的表達(dá)呈正相關(guān),pearson相關(guān)系數(shù)r分別為0.816,0.834。TLR9與NF-κB、TNF-α的表達(dá)呈正相關(guān),pearson相關(guān)系數(shù)r分別為0.781、0.807。3.小鼠結(jié)腸黏膜中TLR4和TLR9蛋白

6、的表達(dá)存在關(guān)聯(lián)并有較好的一致性。
　　 結(jié)論：
　　 1.DSS結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸黏膜TLR4和TLR9的表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組。其表達(dá)越強(qiáng),結(jié)腸黏膜損傷越重。
　　 2.NF-κB、TNF-α的表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組,且與TLR4和TLR9的表達(dá)呈平行關(guān)系。說(shuō)明TLR4和TLR9的表達(dá)與NF-κB、促炎因子的表達(dá)密切相關(guān),TLR4、9在結(jié)腸黏膜異常高表達(dá)經(jīng)由其信號(hào)傳導(dǎo)通路激活下游NF-κB以及炎癥因子TNF-α的釋