pDC功能及TLR9表達在慢性乙型肝炎發(fā)病機制及抗病毒療效中作用的研究.pdf

1、背景與目的： HBV持續(xù)感染可能與病毒、宿主等因素有關，機體免疫反應不足可能是HBV感染后疾病慢性化的主要原因。漿樣樹突狀細胞(pDC)是機體內源性I型IFN產(chǎn)生的主要細胞，它們是人體天然免疫應答的重要組成部分。Toll樣受體9(TLR9)是新近發(fā)現(xiàn)的一種模式識別受體，pDC依靠TLR9識別各種病毒核酸CpG基序而被活化，繼而分泌大量干擾素(IFN)。pDC不僅是聯(lián)系病毒抗原和T細胞之間的紐帶，而且也是天然免疫和特異性免疫之間

2、的橋梁。除特異性免疫應答外，宿主抗HBV的天然免疫應答(特別是以pDC為主的天然免疫應答)可能決定著HBV感染的臨床結局和預后。本文對pDC數(shù)量和功能及TLR9表達在慢性乙型肝炎療效及機制中的研究，對于闡明乙型肝炎慢性化機制，尋找治療慢性乙型肝炎更為有效的方法具有重要意義。 方法： 1.流式細胞分析技術檢測69例慢性HBV感染患者(包括HBV攜帶者14例，慢性乙型肝炎患者30例，乙型肝炎肝硬化患者25例)和21例健康對照

3、組外周血pDC頻率和TLR9表達水平；用CpG ODN2216刺激外周血單個核細胞(PBMC)并與PBMC共培養(yǎng)24 h，檢測上清液中pDC產(chǎn)生。IFN-α的能力；分析pDC數(shù)量、分泌IFN-α功能變化及其臨床意義。免疫組織化學方法檢測pDC胞漿HBsAg和HBcAg。 2.慢性乙型肝炎患者隨機分為兩組(A，B組)。其中A組接受長效干擾素(派羅欣180ug)每周皮下注射一次治療48周；B組先單用長效干擾素(派羅欣180ug)治療

4、12周，再加用恩替卡韋0.5mg/d口服治療12周，然后單用長效干擾素治療24周。治療過程中觀察肝功能、乙肝病毒學標志、HBV DNA等指標，檢測外周血pDC數(shù)量和功能及TLR9表達水平，血清TNF-α及IFN-γ水平等指標。 3.采用標簽SNP(tag SNP)的方法，對209例不同臨床表型的慢性HBV感染人群中TLR9基因多態(tài)性進行分析。 結果： 1.與健康對照組相比，HBV攜帶者、慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬

5、化患者pDC表達TLR9平均熒光強度均有不同程度下降(p<0.05)。與慢性乙型肝炎患者比較，HBV攜帶者及乙型肝炎肝硬化患者gDC表達TLR9平均熒光強度降低，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。健康對照組外周血pDC細胞含量明顯高于慢性乙型肝炎和乙型肝炎肝硬化患者(p<0.05)。慢性HBV感染患者外周血pDC頻率與血清ALT水平呈明顯負相關(r=-0.341，p<0.05)。HBV攜帶者、慢性乙型肝炎患者、乙型肝炎肝硬化患者PBMC

6、中pDC分泌IFN-α的水平明顯低于健康人PBMC中pDC分泌IFN-α的水平(p<0.05)。pDC中有HBsAg和HBcAg表達，pDC功能受損可能與pDC感染HBV有關。 2.聯(lián)合治療組HBeAg定量在治療24周、36周、48周時比單一用藥組顯著下降。有效組與無效組TLR9平均熒光強度，pDC數(shù)量及IFN-α分泌能力在治療2周時均明顯下降，有效組12周時TLR9平均熒光強度，pDC數(shù)量及IFN-α分泌能力顯著恢復，無效組則

7、沒有觀察到這一現(xiàn)象。治療36周時，有效組血清TNF-α，IFN-γ水平顯著升高，與無效組相比，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。基線水平時，有效組IFN-γ水平明顯高于無效組(p=0.018)。 3.①肝炎肝硬化組CC基因型頻率顯著高于健康對照組(p<0.05)；②C等位基因頻率亦顯著高于健康對照組(p<0.05)。 結論： 1.慢性乙型肝炎患者外周血漿樣樹突狀細胞TLR9表達有不同程度下降。pDC是I型干擾素的

8、主要來源，并且慢性乙型肝炎患者pDC分泌IFN-α能力顯著低于正常人，提示慢性乙型肝炎患者pDC功能受損，并可能是乙肝病毒不能被免疫清除、導致病毒持續(xù)存在、疾病慢性化的原因之一。 2.pDC中有HBsAg和HBcAg表達，pDC功能受損可能與其感染HBV有關。 3.pDC在IFN-α治療誘發(fā)的早期免疫應答中發(fā)揮重要作用，抗病毒治療過程中pDC數(shù)量和功能的恢復是機體抗病毒應答的重要因素。 4.TLR9基因可能為乙型