VEGF對血管內(nèi)皮細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶ADAMTS5、ADAMTS4、MMP9表達(dá)的影響.pdf

1、背景及目的：冠心病是嚴(yán)重威脅人類健康的疾病,其中急性冠脈綜合癥(ACS)是其嚴(yán)重類型,發(fā)病機(jī)制包括易損斑塊破裂、血小板聚集、血栓形成,而易損斑塊破裂被視為ACS發(fā)生中的最重要的始動環(huán)節(jié)?，F(xiàn)已證實(shí)細(xì)胞外基質(zhì)降解與合成失衡是導(dǎo)致斑塊穩(wěn)定性下降的主要機(jī)制之一,多種蛋白酶如基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)、含血小板結(jié)合蛋白基序的解聚蛋白樣金屬蛋白酶(a disintegrin andmetallop

2、rotelnase with thrombospondin motifs,ADAMTSs)等可降解纖維帽細(xì)胞外基質(zhì),與動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定密切相關(guān)。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是目前發(fā)現(xiàn)的特異性最強(qiáng)的促血管生成因子,已有臨床研究證實(shí)在不穩(wěn)定斑塊中VEGF表達(dá)水平增高,與ACS嚴(yán)重程度正相關(guān),其可加速動脈粥樣硬化的進(jìn)程,是臨床判斷斑塊穩(wěn)定性及急性冠脈綜合癥的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的重要血清學(xué)標(biāo)志物。但VEGF誘導(dǎo)斑塊不穩(wěn)定具體機(jī)制尚未見相關(guān)研

3、究。
　　本實(shí)驗(yàn)擬探討不同濃度血管內(nèi)皮生長因子rhVEGF165刺激人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)24h后基質(zhì)金屬蛋白酶家族中ADAMTS5、ADAMTS4、MMP9的表達(dá),探索VEGF對斑塊不穩(wěn)定可能的機(jī)制。
　　方法：
　　1.培養(yǎng)臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞,以不同濃度rhVEGF166(實(shí)驗(yàn)組濃度10ng/ml,20ng/ml,50ng/ml,對照組0ng/ml)刺激24小時。
　　2.提取細(xì)胞總RNA,以Re

4、al time PCR檢測血管內(nèi)皮細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶ADAMTS5、ADAMTS4、MMP9 mRNA的表達(dá)水平。
　　3.提取細(xì)胞總蛋白,Western blot檢測內(nèi)皮細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶ADAMTS5、ADAMTS4、MMP9的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.與對照組相比,rhVEGFl65 lOng/ml組內(nèi)皮細(xì)胞ADAMTS5、ADAMTS4、MMP9 mRNA表達(dá)分別為:1.161±0.029,1.238

5、±0.077,1.357±0.059,對照組為1±0,P＜O.05。rhVEGF16520ng/ml組內(nèi)皮細(xì)胞ADAMTS5、ADAMTS4、MMP9 mRNA表達(dá)分別為:2.298±0.092.2.50l±0.009,2.637±0.047,P＜O.05。rhVEGF16550ng/ml組內(nèi)皮細(xì)胞ADAMTS5、ADAMTS4、MMP9 mRNA表達(dá)分別為:2.517±0.019,2.736±0.08,3.21±0.079,p＜0.0

6、5。同一指標(biāo)各組間相比p＜0.05,且ADAMTS5、ADAMTS4及MMP9轉(zhuǎn)錄水平的變化與rhVEGF165的刺激濃度呈正相關(guān)(r=0.873、0.874、0.925,P＜O.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.與對照組相比,rhVEGF165 lOng/ml組內(nèi)皮細(xì)胞ADAMTS5、ADAMTS4、MMP9蛋白水平表達(dá)分別為:0.091±0.006比0.043±0.005,0.147±0.003比0.047±0.005,0.

7、172±0.029比0.086±0.009,P＜O.05。rhVEGFl16520ng/ml組內(nèi)皮細(xì)胞ADAMTS5、ADAMTS4、MMP9蛋白水平表達(dá)分別為:0.1457±0.007比0.043±0.005,0.39±0.007比0·047±0.005,0.525±0.085比0.086±0.009,p＜0.05。rhVEGF16550ng/ml組內(nèi)皮細(xì)胞ADAMTS5、ADAMTS4、MMP9蛋白水平表達(dá)分別為0.1767±0.0

8、03比0.043±0.005,0.624±0.055比0.047±0.005,0.598±0.024比0.086±0.009,p＜0.05。且同一指標(biāo)各組間相比p＜0.05或p＜O.Ol,且ADAMTS5、ADAMTS4及MMP9蛋白表達(dá)總體呈劑量——效應(yīng)關(guān)系(r=0.991、0.970、0.946,P＜O.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.VEGF刺激內(nèi)皮細(xì)胞可引起基質(zhì)金屬蛋白酶家族中ADAMTS5、ADAM