甜菜堿對同型半胱氨酸致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：
　　 研究甜菜堿(Bet)對高濃度同型半胱氨酸(Hcy)誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)損傷是否具有保護(hù)作用;探討其對凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax表達(dá)的影響;測定Bet對SOD活性、MDA含量及上清液中NO含量的影響,探討B(tài)et是否通過抗氧化作用來拮抗Hcy誘導(dǎo)的HUVECs損傷。
　　 方法：
　　 用含15％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)HUVECs細(xì)胞株,當(dāng)細(xì)胞融合至80％時(shí),用免疫熒光

2、技術(shù)鑒定并傳代。培養(yǎng)至第三代后,取對數(shù)生長期的細(xì)胞分成5組:(1)正常對照組:加入等體積的培養(yǎng)液;(2)Hcy損傷組:1mmol/LHcy;(3)Bet低濃度組:1mmol/LHcy+10mmol/LBet;(4)Bet中濃度組:1mmol/LHcy+25mmol/LBet;(5)Bet高濃度組:1mmol/LHcy+50mmol/LBet。各組孵育24h后,采用形態(tài)學(xué)觀察法和MTT法檢測細(xì)胞的增殖存活;以流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率;利

3、用免疫細(xì)胞化學(xué)法和Western-Blotting法檢測細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)量的變化;用相應(yīng)的試劑盒分別檢測細(xì)胞中SOD活性、MDA含量以及細(xì)胞培養(yǎng)液中NO含量。
　　 結(jié)果：
　　 免疫熒光化學(xué)法檢測顯示,細(xì)胞呈陽性反應(yīng),確保了細(xì)胞株來源的可靠性。高濃度的Hcy可明顯抑制HUVECs的生長,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Bet可以降低損傷細(xì)胞的生長抑制率和凋亡率,提高Bcl-2蛋白的表達(dá)而使Bax的表達(dá)明顯減少

4、,免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果與Western-blotting法的結(jié)果一致。此外,Bet對高濃度Hcy誘導(dǎo)的HUVECs損傷具有保護(hù)作用,Bet可以顯著升細(xì)胞中SOD的活性、降低MDA的含量,升高NO的含量。
　　 結(jié)論：
　　 1高濃度的Hcy可抑制細(xì)胞生長,促進(jìn)細(xì)胞凋亡;Bet能夠降低凋亡率、增加細(xì)胞活性,降低Hcy造成的損傷。
　　 2Bet能夠升高Bcl-2蛋白表達(dá)、降低Bax蛋白表達(dá),通過調(diào)控凋亡相關(guān)蛋白來抑制H