硒對(duì)同型半胱氨酸誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：血管內(nèi)皮細(xì)胞是血管壁的天然屏障，具有重要的內(nèi)分泌功能，它是心血管疾病的形成及發(fā)展中的重要角色。內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡被證實(shí)是心血管疾病的重要病理變化。同型半胱氨酸能夠增加心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)，這與它誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)旨在探討硒能否緩解同型半胱氨酸誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及其機(jī)制。
　　方法：①分別以硫酸銅及亞硒酸鈉為Cu和Se的來源，將實(shí)驗(yàn)分為正常組、Hcy組、Cu組及Se組，血管內(nèi)皮細(xì)胞接種24小時(shí)后進(jìn)行藥物處理。Hcy

2、組分別用100μM、250μM、500μM及1000μM溶度的Hcy處理細(xì)胞24小時(shí);Cu組分別用5μM、10μM、15μM及20μM溶度的Cu處理48小時(shí);Se組分別用100 nM、300 nM、500 nM及1000nM溶度的Se處理細(xì)胞48小時(shí)。用CCK-8試劑盒檢測(cè)藥物處理后的各組細(xì)胞活性。②實(shí)驗(yàn)分為正常組、Cu+Hcy組，Hcy溶度分別為100μM、250μM、500μM及1000μM。血管內(nèi)皮細(xì)胞接種24小時(shí)后用15μM溶度

3、的Cu預(yù)處理12小時(shí)，然后用15μM溶度的Cu和各溶度Hcy共同作用細(xì)胞24小時(shí)。用CCK-8試劑盒檢測(cè)藥物處理后的細(xì)胞活性。③將實(shí)驗(yàn)分為正常組，Cu+Hcy組，Cu+Hcy+Se組。細(xì)胞接種24小時(shí)后藥物處理。后兩組中Cu及Se預(yù)處理12小時(shí)，然后藥物共同作用24小時(shí)。Cu、Hcy、Se溶度分別為15μM、500μM、100nM。對(duì)各組進(jìn)行以下方面檢測(cè):CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活性，Annexin V-FITC檢測(cè)細(xì)胞凋亡，檢測(cè)活性氧水平，

4、羅丹明123檢測(cè)線粒體膜電位，測(cè)定谷胱甘肽過氧化物酶活性，測(cè)定caspase3及caspase9活性，qRT-PCR測(cè)定BaxmRNA及Bcl-2mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：⑴與正常組比較，100μM的Hcy組細(xì)胞活性無明顯變化(P＞0.05)，其余各溶度Hcy組細(xì)胞活性更低(P＜0.05）。各實(shí)驗(yàn)溶度的Cu作用細(xì)胞后與正常組比較細(xì)胞活性無明顯變化(P＞0.05）。與正常組比較，Se溶度為100 nM時(shí)對(duì)細(xì)胞活性無明顯影響(P＜0

5、.05），其余更高溶度時(shí)細(xì)胞活性更低(P＜0.05），Cu+Hcy組與正常組比較細(xì)胞活性更低(P＜0.05)。Cu+Hcy+Se組比Cu+Hcy組細(xì)胞活性更高(P＜0.05)，Se能緩解Cu和Hcy導(dǎo)致的細(xì)胞活性降低。⑵與正常組比較，Cu+Hcy組及Cu+Hcy+Se組細(xì)胞的凋亡率均更高(P＜0.05)。Cu+Hcy+Se組比Cu+Hcy組細(xì)胞凋亡率更低(P＜0.05），Se能夠減輕Cu和Hcy誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。⑶熒光強(qiáng)度高則膜電位高，C

6、u+Hcy組的熒光強(qiáng)度最低，正常組最高，Cu+Hcy+Se組位于兩者之間。Se能緩解Cu和Hcy導(dǎo)致的膜電位下降。⑷與正常組比較，Cu+Hcy組及Cu+Hcy+Se組細(xì)胞活性氧的生成水平均更高（P＜0.05）。Cu+Hcy+Se組活性氧的生成水平比Cu+Hcy組更低(P＜0.05)，Se能緩解Cu和Hcy導(dǎo)致的活性氧生成的增加。⑸與正常組比較，Cu+Hcy組的谷胱甘肽過氧化物酶活性更低（P＜0.05）。Cu+Hcy+Se組比正常組及Cu

7、+Hcy組酶活性均更高(P＜0.05），Se能緩解同型半胱氨酸和銅導(dǎo)致的酶活性下降。⑹與正常組比較，Cu+Hcy組及Cu+Hcy+Se組細(xì)胞的兩種酶的活性均更高(P＜0.05)。Cu+Hcy+Se組比Cu+Hcy組兩種酶活性更低(P＜0.05)，Se能緩解Cu和Hcy導(dǎo)致的兩種酶活性升高。⑺BaxmRNA及Bcl-2mRNA的表達(dá)：與正常組比較，Cu+Hcy組及Cu+Hcy+Se組細(xì)胞的BaxmRNA表達(dá)均更高(P＜0.05)。Cu+H

8、cy+Se組比Cu+Hcy組BaxmRNA表達(dá)更低(P＜0.05），Se能減輕Cu和Hcy導(dǎo)致的BaxmRNA表達(dá)升高；與正常組比較，Cu+Hcy組Cu+Hcy+Se組細(xì)胞的bcl-2mRNA表達(dá)更低(P＜0.05)。Cu+Hcy+Se組比Cu+Hcy組bcl-2mRNA表達(dá)更高(P＜0.05)，Se能緩解Cu和Hcy導(dǎo)致的bcl-2mRNA表達(dá)降低(P＜0.05）。
　　結(jié)論：①100μM溶度的Hcy不影響血管內(nèi)皮細(xì)胞活性，更高