廣東省家族性和早發(fā)性乳腺癌BRCA1和BRCA2基因突變的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文廣東省家族性和早發(fā)性乳腺癌BRCAl和BRCA2基因突變的研究答辯委員會(huì)主席:答辯委員會(huì)委員:學(xué)科專(zhuān)業(yè):碩士研究生:導(dǎo)師:年級(jí):?jiǎn)挝唬簩W(xué)位類(lèi)型:乳腺外科周婕蘇逢錫教授二零零四級(jí)中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院醫(yī)學(xué)碩士綴嗎根鋤乞珊?jiǎn)峁ρ?007年5月’廣州廣東行泵政t牛和早發(fā)件乳隙瘕BRCAI和BRCA2軾囡突變的研究摘耍材料和方法1樣本入組標(biāo)準(zhǔn)為:乳腺癌患者并且滿(mǎn)足下列條件之一:(1)有血緣關(guān)系的直系親屬中有一個(gè)或一個(gè)以上的乳腺

2、癌患者,或(2)乳腺癌患者診斷年齡小于35歲。本研究中共收集58個(gè)符合入組條件的乳腺癌患者,其中41例早發(fā)性乳腺癌,17例家族性乳腺癌。每個(gè)入組患者均需抽取5ml外周靜脈血置于含有800mlACD的抗凝管內(nèi)保存。2提取DNA根據(jù)DNA提取試劑盒上的標(biāo)準(zhǔn)提取方法,從外周靜脈血中提取基因組DNA。3多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)設(shè)計(jì)能夠覆蓋BRCAI,BRCA2整個(gè)編碼區(qū)及拼接區(qū)的引物,PCR反應(yīng)體系為50u1,PCR反應(yīng)過(guò)程為95。C5分鐘,9

3、4“C30秒,(63℃到“℃)(05℃/循環(huán))30秒,72“C30秒,15循環(huán);94“C30秒,56“C30秒,72“C30秒,25循環(huán);72℃lO分鐘變性高效液相色譜(DHPLC)變性高效液相色譜(DenaturingHi#PerformanceLiquidChromatography,DHPLC)能夠檢測(cè)PCR產(chǎn)物的突變情況。根據(jù)BRCAI和BRCA2每個(gè)擴(kuò)增片段不同的堿基組成,應(yīng)用機(jī)器自帶的Navigator@軟件進(jìn)行自動(dòng)分析,以

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