廣東省家族性和早發(fā)性乳腺癌BRCA1和BRCA2基因突變的研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文廣東省家族性和早發(fā)性乳腺癌BRCAl和BRCA2基因突變的研究答辯委員會主席：答辯委員會委員：學(xué)科專業(yè)：碩士研究生：導(dǎo)師：年級：單位：學(xué)位類型：乳腺外科周婕蘇逢錫教授二零零四級中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院醫(yī)學(xué)碩士綴嗎根鋤乞珊嗎功炎2007年5月’廣州廣東行泵政t牛和早發(fā)件乳隙瘕BRCAI和BRCA2軾囡突變的研究摘耍材料和方法1樣本入組標(biāo)準(zhǔn)為：乳腺癌患者并且滿足下列條件之一：(1)有血緣關(guān)系的直系親屬中有一個或一個以上的乳腺

2、癌患者，或(2)乳腺癌患者診斷年齡小于35歲。本研究中共收集58個符合入組條件的乳腺癌患者，其中41例早發(fā)性乳腺癌，17例家族性乳腺癌。每個入組患者均需抽取5ml外周靜脈血置于含有800mlACD的抗凝管內(nèi)保存。2提取DNA根據(jù)DNA提取試劑盒上的標(biāo)準(zhǔn)提取方法，從外周靜脈血中提取基因組DNA。3多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)設(shè)計能夠覆蓋BRCAI，BRCA2整個編碼區(qū)及拼接區(qū)的引物，PCR反應(yīng)體系為50u1，PCR反應(yīng)過程為95。C5分鐘，9

3、4“C30秒，(63℃到“℃)(05℃／循環(huán))30秒，72“C30秒，15循環(huán)；94“C30秒，56“C30秒，72“C30秒，25循環(huán)；72℃lO分鐘變性高效液相色譜(DHPLC)變性高效液相色譜(DenaturingHi#PerformanceLiquidChromatography，DHPLC)能夠檢測PCR產(chǎn)物的突變情況。根據(jù)BRCAI和BRCA2每個擴(kuò)增片段不同的堿基組成，應(yīng)用機(jī)器自帶的Navigator@軟件進(jìn)行自動分析，以