慢性乙型肝炎肝纖維化患者外周血CD4+CD25+CD127dim--T細(xì)胞的初步研究.pdf

1、[目的]
　　1.觀察慢性乙型肝炎各纖維化期患者外周血CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞頻率變化并探討其意義。
　　2.初步研究慢性乙型肝炎肝纖維化患者外周血CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞的抑制功能，探討其在肝纖維化病程中的作用。
　　[方法]
　　1.患者分組:按纖維化程度S分期分別將29例經(jīng)B超定位下行肝穿刺組織活檢診斷為肝纖維化的慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者分為S1期組、S2-S

2、3期組和S4期組。
　　2.外周血CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞頻率檢測(cè):流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分別檢測(cè)9例健康對(duì)照者和29例慢性乙型肝炎肝纖維化患者外周血CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞頻率。
　　3.外周血CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞分選:利用磁激活細(xì)胞分選法(MACS)分別從4例健康對(duì)照者和9例慢乙肝肝纖維化患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中先陰性分選CD4+CD127dim/-

3、T細(xì)胞，再陽(yáng)性分選獲取CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞。
　　4.CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞純度鑒定:采用FCM檢測(cè)分選后的細(xì)胞的純度。
　　5.CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞存活率檢測(cè):臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)活細(xì)胞比例計(jì)算分選后細(xì)胞的存活率。
　　6.CD4+CD25+CD127dim/T細(xì)胞抑制試驗(yàn):抗CD3單抗、抗CD28單抗和hIL-2細(xì)胞因子包被96孔U型板后，分別將分選獲取

4、的CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞與CD4+CD25CD127highT細(xì)胞（效應(yīng)性T細(xì)胞）按0∶1、1∶1、1∶4、1∶0于96孔U型板中共培養(yǎng)6天，收集細(xì)胞，通過(guò)計(jì)數(shù)計(jì)算細(xì)胞的抑制率來(lái)觀察CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞的抑制功能。
　　[結(jié)果]
　　1.按纖維化程度S分期，將29例慢性乙型肝炎肝纖維化患者分為S1期組9例、S2-S3期組11例和S4期組9例。
　　2.隨著肝纖維化程度的加重

5、（從S1期到S4期），患者外周血CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞頻率逐漸減少(p＜0.05)，分別為S1期組（6.27％±0.84％）顯著高于健康對(duì)照組的(5.09％±0.59％)(p＜0.05)，S2-S3期組(5.13％±1.24％)與健康對(duì)照組無(wú)顯著差異(p＞0.05)，S4期組(3.91％±1.29％)顯著低于健康對(duì)照組(p＜0.05)。
　　3.分選獲取的CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞經(jīng)FCM檢

6、測(cè)純度為（90.57％±6.38％）
　　4.分選后的細(xì)胞經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色存活率為(98.25％±1.55％)。
　　5.健康對(duì)照組和慢性乙型肝炎肝纖維化組患者外周血CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞均呈低增殖狀態(tài)且兩組之間無(wú)顯著差異(p＞0.05)，兩組1∶1的抑制率分別為（94.71％±4.95％）和(95.17％±3.65％)，1∶4的抑制率分別為(76.69％±3.24％)和（71.12％±2.44％），兩組外

7、周血CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞均能顯著抑制效應(yīng)性T細(xì)胞增殖(p＜0.05)，但1∶1明顯強(qiáng)于1∶4(p＜0.05)。而健康對(duì)照組和慢乙肝肝纖維化組兩個(gè)同比例之間的抑制功能均無(wú)顯著差異(p＞0.05)。
　　[結(jié)論]
　　1.隨著慢乙肝患者肝纖維化進(jìn)展，外周血CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞頻率逐漸下降。
　　2.慢性乙型肝炎肝纖維化者外周血CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞呈數(shù)量