(2-羥丙基)-β-環(huán)糊精對(duì)兔后肢缺血模型血管新生作用的研究.pdf

1、外周動(dòng)脈疾病(peripheral arterial disease，PAD)是一種常見(jiàn)的發(fā)生在外周血管、尤其是下肢動(dòng)脈的血流障礙性疾病。下肢PAD癥狀多樣，嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量[1]。PAD標(biāo)志著患者體內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化性疾病狀態(tài)的存在，并且與增加心腦血管疾病死亡率的諸多誘因相關(guān)。
　　經(jīng)典的下肢PAD療法包括經(jīng)皮腔內(nèi)血管成形術(shù)(percutaneous transluminalangioplasty, PTA)、血管架橋手術(shù)(by

2、pass)等，然而由于這些療法局限性，仍使許多患者最終不得不接受截肢手術(shù)。有人開(kāi)始采用干細(xì)胞移植、基因?qū)氲戎委熜匝苄律═herapeutic Angiogenesis）療法來(lái)重建缺血組織的血運(yùn)。生物體內(nèi)天然存在的血管生成相關(guān)的細(xì)胞因子是該療法的理論基礎(chǔ)。
　　環(huán)糊精是一類環(huán)狀低聚糖，其擁有親水外圍和疏水核心的結(jié)構(gòu)可以選擇性的包絡(luò)疏水物質(zhì)，提高包絡(luò)物質(zhì)的水溶性，被人們廣泛用于有機(jī)物合成、分離等過(guò)程，可以作為醫(yī)用輔料與食品添加劑

3、等。體外實(shí)驗(yàn)證明環(huán)糊精具有一定的促血管新生作用[9]。本研究通過(guò)每日局部肌注(2-羥丙基)-β-環(huán)糊精((2-Hydroxypropyl)-beta-cyclodextrin）以研究其對(duì)兔后肢缺血模型血管新生的作用。
　　材料與方法：
　　一、動(dòng)物分組、給藥方式及后肢缺血模型建立
　　20只新西蘭大白兔，體重(2.30±0.18kg)，雄性，隨機(jī)分為4組，每組5只，B、C、D組采用濃度分別為10-9mol/L、10-8

4、mol/L、10-7mol/L的(2-羥丙基)-β-環(huán)糊精肌肉注射，A組采用磷酸緩沖液作為對(duì)照。包括對(duì)照組給藥方式為肌肉注射，注射點(diǎn)為左側(cè)大腿中部4面各1針，小腿前后各1針，共計(jì)6針，每針注射0.1ml，注射時(shí)間為股動(dòng)脈結(jié)扎切除術(shù)后第7天至27天，共計(jì)21天。股動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)采用大腿部正中與股骨長(zhǎng)軸一致的直線切口，近端結(jié)扎點(diǎn)為股動(dòng)脈分出旋股外側(cè)動(dòng)脈之后，結(jié)扎后切除結(jié)扎點(diǎn)間股動(dòng)脈。
　　二、經(jīng)耳廓后動(dòng)脈后肢動(dòng)脈數(shù)字減影血管造影
　

5、　觀察側(cè)支循環(huán)建立采用經(jīng)耳廓后動(dòng)脈后肢動(dòng)脈數(shù)字減影血管造影，各組均在術(shù)后第28天取材前進(jìn)行造影檢查。選取右側(cè)耳廓后動(dòng)脈以18G動(dòng)脈穿刺針穿刺耳廓后動(dòng)脈噴血后，0.014-inch微導(dǎo)絲透視下繼續(xù)輕柔并快速送入導(dǎo)絲至右頸總動(dòng)脈，引入1.8F微導(dǎo)管，透視下與導(dǎo)絲相互配合進(jìn)入左側(cè)下肢動(dòng)脈，導(dǎo)管頭留置于髂內(nèi)、外動(dòng)脈分叉前進(jìn)行造影。動(dòng)態(tài)觀察造影圖像，計(jì)數(shù)側(cè)支血管數(shù)量。
　　三、免疫組織化學(xué)分析
　　股動(dòng)脈造影隨訪后處死動(dòng)物，留取大腿半

6、膜肌。標(biāo)本OCT包埋，切成8μm厚連續(xù)肌肉橫斷面切片。CD31鼠抗人單克隆抗體標(biāo)記內(nèi)皮細(xì)胞。隨機(jī)選取10個(gè)200×放大視野，計(jì)數(shù)陽(yáng)性染色肌肉毛細(xì)血管密度（/mm2）和血管/肌纖維比值。
　　四、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差形式表示，應(yīng)用GraphPadPrism5.0軟件對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析和重復(fù)測(cè)量單因素方差分析。當(dāng)P＜0.05時(shí)，認(rèn)為結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、血管造影隨訪計(jì)數(shù)

7、側(cè)支血管數(shù)量
　　到術(shù)后第28天，各組均形成側(cè)支循環(huán)，造影結(jié)果顯示A～D組形成側(cè)支血管數(shù)分別為3.60±1.41、4.20±1.48、6.80±1.79和5.20±1.48，單因素方差分析顯示(2-羥丙基)-β-環(huán)糊精對(duì)側(cè)支循環(huán)建立具有影響(P＜0.05)。與A組相比，C組側(cè)支血管數(shù)量明顯增多(P＜0.01)，B、D組增高不明顯(P＞0.05)。
　　2、CD31免疫組化染色計(jì)數(shù)肌肉毛細(xì)血管密度和血管/肌纖維比值
　　

8、免疫組化染色顯示A～D組毛細(xì)血管密度分別為89.29±8.56、103.50±17.67、127.80±25.40和112.80±22.38/mm2，血管/肌纖維數(shù)比值分別為0.503±0.077、0.521±0.114、0.676±0.031和0.557±0.098，單因素方差分析顯示(2-羥丙基)-β-環(huán)糊精對(duì)肌肉毛細(xì)血管密度和血管/肌纖維比值有影響(P＜0.05)。與A組相比，C組的毛細(xì)血管密度和血管/肌纖維比值明顯增長(zhǎng)(P＜0.