炎癥相關(guān)因子和microRNAs在胃MALT淋巴瘤中發(fā)病機(jī)制的探討.pdf

1、目的：
　　 MicroRNA是一類內(nèi)源性、不編碼蛋白的RNA，長(zhǎng)約19-25個(gè)核苷酸長(zhǎng)度，通過堿基配對(duì)原則結(jié)合到靶mRNA的3’UTR，進(jìn)而降解靶mRNA或抑制靶mRNA的翻譯，從而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。microRNA發(fā)揮著抑癌基因或致癌基因的雙重效應(yīng)，涉及到腫瘤的新陳代謝、細(xì)胞增殖及凋亡、腫瘤侵襲等多個(gè)方面，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用，不同的腫瘤有著不同的microRNA表達(dá)譜。胃MALT淋巴瘤占MALT淋巴瘤的40％

2、-60％。研究表明，HP感染引起的胃黏膜淋巴細(xì)胞增生是MALT淋巴瘤病變基礎(chǔ)，部分胃MALT淋巴瘤抗HP治療可達(dá)到臨床完全緩解。目前對(duì)于microRNA在慢性炎癥向腫瘤轉(zhuǎn)化過程中的作用尚未完全明確。本研究在胃MALT淋巴瘤中對(duì)胃MALT淋巴瘤中microRNA表達(dá)變化及發(fā)病機(jī)制進(jìn)行了初步研究，為MALT淋巴瘤的預(yù)防、和靶向治療提供了一定的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　 方法：
　　 (1)檢測(cè)microRNA在胃MALT淋巴

3、瘤腫瘤組織及瘤旁組織中表達(dá)譜的差異。
　　 ①收集長(zhǎng)海醫(yī)院11例胃MALT淋巴瘤病例，根據(jù)HE形態(tài)、免疫標(biāo)記，結(jié)合WHO2008淋巴血液系統(tǒng)腫瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)確定為胃MALT淋巴瘤。②采用微陣芯片技術(shù)檢測(cè)microRNA表達(dá)譜變化。分別提取腫瘤及瘤旁組織總RNA，然后進(jìn)行microRNA芯片篩查及數(shù)據(jù)分析。③采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)14例胃MALT淋巴瘤腫瘤組織及瘤旁組織基因microRNA-188-5p、microRNA-1

4、34、microRNA-150、microRNA-100、microRNA-378、microRNA-155六條基因的表達(dá)差異。用SYBRGreenRealtimePCRMasterMix實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增，U6作為內(nèi)參，3個(gè)復(fù)孔。以2-△Ct計(jì)算6條基因的腫瘤及瘤旁組織相對(duì)表達(dá)量。④根據(jù)患者臨床資料，利用SPSS13.0軟件包分析microRNA與患者預(yù)后的關(guān)系。
　　 (2)microRNA差異表達(dá)基因的靶基因蛋白檢測(cè)：

5、r>　　 ①通過(http://www.mirbase.org/andhttp://www.targetscan.org)查出miR-100及miR-378兩條基因的靶基因分別是TNFAIP8、SMARCA5和MMP14、MAPK1。②選取50例胃MALT淋巴瘤手術(shù)病人的腫瘤及瘤旁病理組織，采用LSAB法檢測(cè)MAPK1、TNFAIP8、SMARCA5和MMP14的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 (1)檢測(cè)microRNA在

6、胃MALT淋巴瘤腫瘤組織及瘤旁組織中表達(dá)譜的差異結(jié)果：
　　 ①microRNA基因芯片分析結(jié)果：表達(dá)量相差兩倍以上定為表達(dá)有差異，腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)的基因有：microRNA-15a、microRNA-155、microRNA-16、microRNA-100、microRNA-142-3P、microRNA-150。表達(dá)下調(diào)的基因有：microRNA-375、microRNA-188-5p、microRNA-663、micro

7、RNA-134、microRNA-31、microRNA-1246、microRNA-200c、microRNA-12245p、microRNA-378、microRNA-200b。②RT-PCR結(jié)果分析結(jié)果：microRNA-188-5p腫瘤VS瘤旁：8.52±0.91VS9.05±1.03，P＞0.05；microRNA-100腫瘤VS瘤旁；6.83±1.18VS6.92±1.36，P＞0.05；microRNA-150腫瘤VS瘤旁

8、：4.784±1.37VS5.32±1.34，P＞0.05；microRNA-378腫瘤VS瘤旁：9.13±1.04VS7.38±1.44，P＜0.05；microRNA-134腫瘤VS瘤旁：12.92±1.05VS12.46±1.06，P＞0.05；miR-155腫瘤VS瘤旁：8.52±0.92VS9.05±1.03，P＞0.05。③利用SPSS軟件分析包，對(duì)患者臨床資料進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，miRNA-378對(duì)于有無胃潰瘍P=0.01。mi

9、RNA-100對(duì)于HP陽(yáng)性P=0.05，miRNA-155對(duì)于有無侵犯肌層P=0.03。
　　 (2)microRNA差異表達(dá)基因的靶基因蛋白檢測(cè)結(jié)果
　　 免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示腫瘤組織中，microRNA-378和microRNA-100的靶基因蛋白MAPK1、TNFAIP8、MMP14呈低表達(dá)，SMARCA5呈高表達(dá)。
　　 結(jié)論：
　　 (1)胃MALT淋巴瘤中腫瘤組織與瘤旁組織之間microRNA

10、表達(dá)譜具有差異性，其中16條基因具有顯著差異表達(dá)。
　　 (2)胃MALT淋巴瘤中，miR-378腫瘤組織表達(dá)較瘤旁組織表達(dá)高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；miR-378表達(dá)和患者胃潰瘍的發(fā)生有關(guān)；HP感染可能是通過miR-100表達(dá)升高導(dǎo)致淋巴瘤的發(fā)生；miR-155對(duì)于患者腫瘤侵襲性有關(guān)。
　　 (3)miR-378基因?qū)е挛笣兛赡苁峭ㄟ^靶基因MMP14、MAPK1蛋白表達(dá)實(shí)現(xiàn)的，HP感染可能增加了miR-100基因的表達(dá)，進(jìn)