藤黃酸抗淋系腫瘤細(xì)胞系的作用及分子機(jī)制研究.pdf

1、本研究分為三部分： 第一部分、藤黃酸對淋系腫瘤細(xì)胞系的細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)作用 目的:研究藤黃酸對人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株Jurkat細(xì)胞和人Burkitt 淋巴瘤細(xì)胞株Raji細(xì)胞體外增殖及細(xì)胞周期的影響。 方法:采用MTT 法檢測藤黃酸處理后的Jurkat細(xì)胞和Raji細(xì)胞的增殖活性，PI染色流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期分布，免疫印跡檢測藤黃酸對Jurkat細(xì)胞和Raji細(xì)胞Cyclin D3 及Cycli

2、n E蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果:(1)藤黃酸對Jurkat和Raji細(xì)胞具有明顯的增殖抑制作用，藤黃酸作用Jurkat細(xì)胞24 h，48 h，72 h的半數(shù)抑制濃度IC50 分別為1.69±0.09，0.98±0.13，0.67±0.12μmol/L，P<0.01；藤黃酸作用Raji細(xì)胞24 h，48 h，72 h的半數(shù)抑制濃度IC50 分別為1.34±0.06，0.39±0.03，0.30±0.02 μmol/L，P<0.01。

3、(2)藤黃酸呈劑量依賴式作用于Jurkat細(xì)胞和Raji細(xì)胞使細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期，其比例分別由41.78％提高到62.72％與40.23％提高到67.30％。(3)藤黃酸以劑量依賴式降低細(xì)胞周期蛋白Cyclin D3和Cyclin E的表達(dá)。 結(jié)論:藤黃酸能抑制Jurkat細(xì)胞和Raji細(xì)胞增殖，使Jurkat細(xì)胞和Raji細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期。藤黃酸的細(xì)胞周期阻滯作用可能通過Cyclin D3和Cyclin

4、 E的下調(diào)有關(guān)。 第二部分、藤黃酸對淋系腫瘤細(xì)胞系的細(xì)胞凋亡及抗凋亡蛋白的調(diào)控作用 目的:研究藤黃酸對人急性T 淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株Jurkat細(xì)胞和人Burkitt 淋巴瘤細(xì)胞株Raji細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡及抗凋亡蛋白的調(diào)控作用。 方法:采用Annexin-V/PI 雙標(biāo)法檢測藤黃酸對Jurkat細(xì)胞和Raji細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用，免疫印跡檢測藤黃酸對Jurkat細(xì)胞和Raji細(xì)胞抗凋亡蛋白NF-κB和Bcl-xL蛋白

5、表達(dá)的影響。 結(jié)果:0，1，2，3 μmol/L 藤黃酸處理后的Jurkat細(xì)胞的早期凋亡率分別為0.95％、2.09％、34.03％和38.30％。藤黃酸處理后的Raji細(xì)胞的早期凋亡率分別為4.21％、10.76％、16.13％和24.38％。以0，0.5，1.0，2.0，4.0 μmol/L 藤黃酸處理Jurkat細(xì)胞24h 后，0和0.5μmol/L 藤黃酸對NF-κB的表達(dá)無明顯改變P>0.05，1.0、2.0 及4.

6、0μmol/L藤黃酸處理組NF-κB的表達(dá)隨劑量增加而減低P<0.01；Bcl-xL 呈劑量依賴性遞減P<0.01。以0，0.5，1.0，2.0，4.0 μmol/L 藤黃酸處理Raji細(xì)胞24h 后，，0和0.5μmol/L藤黃酸對Bcl-xL的表達(dá)無明顯改變P>0.05，1.0、2.0 及4.0μmol/L 藤黃酸處理組Bcl-xL的表達(dá)隨劑量增加而減低P<0.01；NF-κB 呈劑量依賴性遞減P<0.01。 結(jié)論:藤黃酸能

7、夠誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞和Raji細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能部分通過下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-xL和NF-κB的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)。 第三部分、藤黃酸對淋系腫瘤細(xì)胞系死亡誘導(dǎo)清理子的調(diào)控作用 目的:探討藤黃酸對人急性T 淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株Jurkat細(xì)胞和人Burkitt 淋巴瘤細(xì)胞株Raji細(xì)胞的抗癌作用的分子機(jī)理。 方法:免疫印跡檢測藤黃酸對Jurkat細(xì)胞和Raji細(xì)胞DIO-1、Caspase-3 及其裂解產(chǎn)物p17和p2

8、0 表達(dá)的影響。Hoechst33258 及免疫熒光化學(xué)雙標(biāo)法檢測藤黃酸作用下DIO-1 核轉(zhuǎn)位現(xiàn)象。 結(jié)果:隨著藤黃酸濃度的升高，Jurkat細(xì)胞和Raji細(xì)胞表達(dá)DIO-1的量先升高后降低，對應(yīng)2.0μmol/L 藤黃酸的DIO-1的表達(dá)量最高，雖然4.0μmol/L 藤黃酸作用24h后DIO的表達(dá)較2.0μmol/L組明顯降低但仍明顯高于對照組；隨著作用時(shí)間的延長，2.0μmol/L 藤黃酸處理后，DIO-1 表達(dá)量遞增。

9、Pro-Caspase3 片段的表達(dá)呈上升趨勢且出現(xiàn)相應(yīng)活化的Caspase3 片段p17和p20。雖然兩個(gè)片段在0.5μmol/L 藤黃酸處理時(shí)即出現(xiàn)，但顯著性的增高出現(xiàn)在2μmol/L 藤黃酸組，4μmol/L 藤黃酸處理組最高。藤黃酸作用Jurkat細(xì)胞和Raji細(xì)胞后，DIO-1 由胞漿轉(zhuǎn)位入胞核。 結(jié)論:藤黃酸能上調(diào)DIO-1 表達(dá)及與DIO-1的核轉(zhuǎn)位有關(guān)。藤黃酸誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞和Raji細(xì)胞凋亡可能通過DIO-