壽爾智膠囊對老年性癡呆與海馬神經(jīng)元細(xì)胞離子通道的影響.pdf

1、目的：運(yùn)用膜片鉗技術(shù)原理和全細(xì)胞記錄方式研究壽爾智膠囊對健康大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞及AD模型大鼠腦神經(jīng)遞質(zhì)所表達(dá)的離子通道的影響，從而探討中藥防治老年性癡呆的機(jī)理。 方法：(1)運(yùn)用血清藥理學(xué)方法，制備家兔含藥血清。分為壽爾智含藥血清組、哈伯因含藥血清組和生理鹽水血清組(簡稱空白組)。壽爾智含藥血清組以川芎嗪(壽爾智組藥物之一，川芎的有效成分)為代表成分進(jìn)行定性檢測。 (2)運(yùn)用神經(jīng)元細(xì)胞分散及培養(yǎng)技術(shù)，分散和培養(yǎng)海馬神經(jīng)元

2、細(xì)胞運(yùn)用于膜片鉗技術(shù)和全細(xì)胞記錄方式記錄離子通道電流。 (3)運(yùn)用離子通道的原理及膜片鉗全細(xì)胞記錄方式分別記錄各組(加含藥血清前后)海馬神經(jīng)元細(xì)胞鈉離子、鉀離子及L—型鈣離子通道電流，并觀察其I—V曲線的變化。 (4)運(yùn)用D—半乳糖眼球后注射方法復(fù)制AD模型大鼠，并運(yùn)用分子克隆技術(shù)，神經(jīng)遞質(zhì)基因表達(dá)系統(tǒng)及膜片鉗技術(shù)記錄AD模型大鼠腦mRNA在爪蟾卵母細(xì)胞上所表達(dá)的神經(jīng)遞質(zhì)通道電流和跨膜電壓，觀察壽爾智含藥血清對其跨膜電壓

3、和通道電流的影響。 結(jié)果：(1)壽爾智含藥血清中藥代表成分川芎嗪定性檢測結(jié)果表明兔血清中含有壽爾智方藥中的藥物成分。 (2)分離后培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元細(xì)胞生長良好，培養(yǎng)12-15天的海馬神經(jīng)元細(xì)胞貼壁完全，細(xì)胞體積較大，有利于高阻封接，在細(xì)胞記錄中能觀察到明顯的突觸自發(fā)活動。 (3)壽爾智含藥血清能有效增強(qiáng)鈉離子通道電流峰值，加速鈉離子通道失活；明顯增強(qiáng)鉀電流峰值，增加鉀通道電導(dǎo)；有效抑制L—型鈣離子電流峰值，與對照

4、組比較有顯著性差異(p＜0.05)。 (4)壽爾智含藥血清能增強(qiáng)AD模型大鼠腦mRNA在爪蟾卵母細(xì)胞上所表達(dá)的神經(jīng)遞質(zhì)通道電流和跨膜電壓，與對照組比較有顯著性差異(p＜0.05)。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)研究表明壽爾智對于體外培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞鈉離子、鉀離子、L—型鈣離子通道電流及其相關(guān)I—V曲線具有明顯的影響。中藥復(fù)方壽爾智能明顯提高鈉離子、鉀離子電流INa IK的峰值，同時可使鈉離子通道迅速失活，而增加鉀離子通道電導(dǎo)，使

5、海馬神經(jīng)元除極化時間縮短、迅速產(chǎn)生較強(qiáng)幅度的動作電位，抑制海馬神經(jīng)元細(xì)胞持續(xù)去極化，使其復(fù)極化時間縮短。壽爾智能有效抑制鈣電流幅度，即具有明顯的阻滯鈣離子內(nèi)流的作用，降低細(xì)胞內(nèi)鈣含量，防止因鈣超載引起的細(xì)胞凋亡。 研究壽爾智對AD模型大鼠腦神經(jīng)遞質(zhì)所表達(dá)的離子通道電流的影響，其結(jié)果表明壽爾智能有效促進(jìn)興奮性神經(jīng)遞質(zhì)釋放。因此壽爾智通過上述作用機(jī)理產(chǎn)生了對海馬神經(jīng)元既興奮神經(jīng)細(xì)胞又節(jié)制其興奮性神經(jīng)遞質(zhì)過度釋放的作用。其中主要以加速