大鼠海馬神經(jīng)元中酸敏感離子通道的特性和功能研究.pdf

1、該課題采用急性分離的技術(shù),觀察了急性分離的海馬CA1區(qū)神經(jīng)元上ASICs電流特性;并結(jié)合RT-PCR、Western blot、免疫組化、細(xì)胞培養(yǎng)及質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)染等實(shí)驗(yàn)方法,進(jìn)一步研究了缺血后各個(gè)ASICs亞基的變化及可能的機(jī)制.主要的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1.急性分離的海馬CA1區(qū)神經(jīng)元上ASICs樣電流的電生理學(xué)特性 該實(shí)驗(yàn)中,我們觀察到當(dāng)胞外的pH降低到6.8時(shí),可以激活急性分離的海馬CA1區(qū)神經(jīng)元產(chǎn)生一個(gè)內(nèi)向電流,并隨著pH的降低,該

2、電流的峰值也逐漸增大,在pH 4.5時(shí)達(dá)到最大,EC<,50>接近于6.1;藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn),該電流對(duì)TTX不敏感,但可以被amiloride——DEG/ENaC通道非特異性的阻斷劑,濃度依賴性的抑制.2.全腦缺血期間CaMKII和NMDA受體激活介導(dǎo)ASIC1a亞基磷酸化 大量的研究表明,表達(dá)在外周神經(jīng)系統(tǒng)中的ASICs可以感受信息傳遞過(guò)程中pH的變化,而對(duì)感覺信息的傳遞過(guò)程進(jìn)行調(diào)節(jié).中樞神經(jīng)系統(tǒng)中ASICs的分布非常廣泛,組織酸化也是

3、生理、病理情況下最常見的現(xiàn)象之一.基因敲除的實(shí)驗(yàn)提示生理?xiàng)l件下,ASIC1與突觸可塑性有關(guān),參與了LTP的產(chǎn)生機(jī)制.但對(duì)病理?xiàng)l件下ASICs的功能研究不是很多.該實(shí)驗(yàn)就采用實(shí)驗(yàn)性缺血、和全腦缺血的模型,從單細(xì)胞水平和在體水平兩個(gè)層次觀察了缺血刺激對(duì)海馬神經(jīng)元上ASICs各個(gè)亞基的調(diào)節(jié)及可能的機(jī)制.結(jié)果提示在缺血期間ASIC1a可以作為NMDA受體的下游物質(zhì)介導(dǎo)部分的神經(jīng)毒效應(yīng).臨床研究表明,防治缺血/缺氧的藥物,如谷氨酸受體的拮抗劑,由