2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究內(nèi)側(cè)顳葉癲癇(mesial temporal lobe epilepsy, mTLE)大鼠模型以及阻斷泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(ubiquitin-proteasome system,UPS)后各個時期海馬組織的病理學(xué)改變,分析泛素(Ubiquitin,Ub)、Nedd4-2、C(1)C-2的表達(dá)變化,探討Nedd4-2/C(1)C-2泛素化信號通路在mTLE發(fā)病機制中的作用。
  方法:25日齡SD大鼠75只(清潔級),隨機

2、分為3組,對照組、模型組、MG-132(蛋白酶體抑制劑)預(yù)處理組。模型組及預(yù)處理組大鼠分別予以相應(yīng)藥物(匹羅卡品、氯化鋰、MG-132等)腹腔注射進行造模,誘導(dǎo)出現(xiàn)癲癇持續(xù)狀態(tài)(Status epilepticus,SE),對照組用等量生理鹽水代替。造模成功后,根據(jù)SE后獲取標(biāo)本的時間不同將各組分別隨機分為3個亞組,即急性期組、潛伏期組、慢性期組。(1)對照組、模型組的各亞組:應(yīng)用免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation

3、,Co-Ip)技術(shù)、免疫熒光雙標(biāo)結(jié)合激光共聚焦技術(shù)分析大鼠海馬中Ub與Nedd4-2是否存在相關(guān)性;(2)對照組、模型組、MG-132預(yù)處理組的各亞組:對各組大鼠模型進行行為學(xué)觀察;對各組大鼠腦組織切片行HE染色、尼氏染色,觀察各組神經(jīng)元的丟失,Timm染色觀察苔蘚纖維出芽(Moss fiber sprouting,MFS);采用Western blot技術(shù)檢測各組大鼠海馬中Ub、Nedd4-2、C(1)C-2的表達(dá)水平。
  結(jié)

4、果:對照組大鼠行為學(xué)及組織病理學(xué)均無改變。氯化鋰-匹羅卡品腹腔注射造模成功率為90.0%,死亡率為24.1%,有73.7%的大鼠在8周后出現(xiàn)慢性自發(fā)發(fā)作。模型組大鼠海馬神經(jīng)元丟失明顯,可見MFS,MG-132預(yù)處理組病理改變較模型組更為明顯,兩組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
  Co-IP及免疫熒光雙標(biāo)結(jié)合激光共聚焦技術(shù)證明Ub與Nedd4-2是有相互關(guān)系的蛋白。Western bolt檢測模型組和MG-132預(yù)處理組

5、Ub、Nedd4-2、CIC-2表達(dá)均存在變化。Ub結(jié)果:模型組與對照組比較表達(dá)無明顯變化;MG-132預(yù)處理組與對照組及模型組比較,急性期及潛伏期中表達(dá)上升,慢性期中表達(dá)下降(P<0.05);Nedd4-2結(jié)果:模型組與對照組比較,急性期及潛伏期中表達(dá)下降,慢性期中表達(dá)上升(P<0.05);MG-132預(yù)處理與對照組比較,三個時期表達(dá)均下降(P<0.05),與模型組比較,在急性期、慢性期表達(dá)下降,潛伏期表達(dá)上升(P<0.05);CIC

6、-2結(jié)果:模型組和對照組的比較與Nedd4-2一致;MG-132預(yù)處理組與對照組比較,在急性期及慢性期表達(dá)降低,在潛伏期升高(P<0.05),與模型組的比較與Ub相同。
  結(jié)論:(1)在正常及mTLE大鼠模型的海馬中均存在Ub介導(dǎo)的信號通路,Nedd4-2是這一途徑中的一種關(guān)鍵的泛素-蛋白連接酶(ubiquitin-protein ligases,E3s),CIC-2是Nedd4-2的靶蛋白之一;(2)Nedd4-2/C(1)C

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