TIM-1信號(hào)通路在IgA腎病小鼠發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、目的：
　　建立IgA腎病小鼠模型來明確IgA腎病小鼠腎臟組織中TIM-1的表達(dá)，及對(duì) IgA腎病小鼠腎臟病理損害的影響，以及對(duì) IgA腎病小鼠 Th1、Th2、TLR4信號(hào)通路的影響，初步探索在IgAN發(fā)病機(jī)制中TIM-1信號(hào)通路的作用。
　　方法：
　　挑選36只雄性SPF級(jí)BALB/c小鼠來構(gòu)建IgA腎病模型。分為正常對(duì)照組、正常對(duì)照組+anti-TIM1組、IgAN模型組、IgAN模型組+anti-TIM1組。

2、Anti-TIM1每周一次腹腔注射100ug，持續(xù)7周。實(shí)驗(yàn)期間主要研究以下幾點(diǎn)：1、各組小鼠一般情況的差異；2、通過腎臟病理切片，鑒定 IgAN模型是否成功；3、采用Westernblot法測(cè)各組小鼠腎臟TLR4、MyD88、NF-κB、IFN-γ、IL-4、TIM-1的表達(dá)；4、半定量 RT-PCR及免疫組化技術(shù)檢測(cè)TLR4、MyD88、NF-κB、IFN-γ、IL-4、TIM1在四組小鼠腎臟組織上的表達(dá)情況；5.對(duì) IgAN模型組

3、、IgAN+anti-TIM1組的TIM-1表達(dá)與IL-4、IFN-γ、IFN-γ/IL-4比值及腎臟病理指標(biāo)進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析。
　　結(jié)果：
　　1.本研究中正常對(duì)照+anti-TIM-1組、IgAN模型組和IgAN+anti-TIM-組小鼠體重增長(zhǎng)量小于正常對(duì)照組小鼠，模型組小鼠及給予 anti-TIM-1抗體處理組小鼠均出現(xiàn)毛發(fā)光澤度變差，且不同程度的活動(dòng)減少，但實(shí)驗(yàn)過程中小鼠均未死亡。
　　2.四組小

4、鼠腎組織病理損傷程度：HE染色切片光鏡下可見 IgAN模型組腎小球系膜細(xì)胞有中至重度增生，腎間質(zhì)出現(xiàn)纖維化樣改變，炎性細(xì)胞廣泛浸潤(rùn)，而IgAN+anti-TIM1組僅可見系膜輕度增生。小鼠Katafuchi評(píng)分為IgAN模型組（6.56±1.13）、IgAN+anti-TIM1組（3.22±0.97）顯著高于正常對(duì)照組（1.33±0.50），且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；IgAN模型組 Katafuchi評(píng)分顯著高于IgAN+anti

5、-TIM1組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。腎組織IgA免疫熒光IgAN模型組在高倍鏡下可見系膜區(qū)有+++～++++的顆粒狀或團(tuán)塊狀綠色熒光沉積，但是IgAN+anti-TIM1組僅有+~++的沉積。利用K-W H檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)IgAN模型組、IgAN+anti-TIM1組免疫熒光分級(jí)高于正常對(duì)照組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；IgAN+anti-TIM1組免疫熒光分級(jí)低于IgAN模型組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　3.

6、免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果：IgAN模型組與IgAN+anti-TIM-1組中TIM1、TLR4、MyD88、NF-κbp65在腎小球及腎小管的表達(dá)較正常對(duì)照組明顯增多，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；IgAN+anti-TIM-1組中TLR4、MyD88、TIM1、NF-κbp65的表達(dá)較IgAN模型組均明顯下降，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01)。
　　4. Western Blot檢測(cè)結(jié)果：IgAN模型組和IgAN+anti-TI

7、M-1組中TIM1、TLR4、MyD88、NF-κbp65、IL-4、 IFN-γ的表達(dá)量都比正常對(duì)照組高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在正常對(duì)照+anti-TIM-1組與正常對(duì)照組之間TIM1、TLR4、MyD88、NF-κbp65、IL-4、 IFN-γ的蛋白表達(dá)量的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。IgAN+anti-TIM-1組中TIM1、TLR4、MyD88、NF-κbp65、IL-4、IFN-γ的蛋白表達(dá)量低于IgA

8、N模型組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　5.實(shí)時(shí)熒光定量法檢測(cè)結(jié)果：IgAN模型組和IgAN+anti-TIM-1組中TIM1、TLR4、MyD88、NF-κbp65、IL-4mRNA表達(dá)水平均高于正常對(duì)照組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。在正常對(duì)照+anti-TIM-1組與正常對(duì)照組之間TIM1、TLR4、MyD88、NF-κbp65、IL-4、IFN-γmRNA表達(dá)水平的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。IgAN+a

9、nti-TIM-1組中TIM1、TLR4、MyD88、NF-κbp65、IL-4mRNA表達(dá)量低于IgAN模型組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。IgAN+anti-TIM-1組中IFN-γmRNA表達(dá)量低于IgAN模型組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　6.相關(guān)性分析結(jié)果：IgAN組和IgAN+anti-TIM1組中TIM-1mRNA與IL-4、IFN-γ及IFN-γ/IL-4的相關(guān)性， TIM-1與IL-4、IFN-

10、γ均為正相關(guān)，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；TIM-1與 IFN-γ/ IL-4呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)性沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。IgAN組和IgAN+anti-TIM1組中TIM-1mRNA與腎臟病理Katafuchi評(píng)分及腎臟IgA免疫熒光分級(jí)的相關(guān)性分析，TIM-1與Katafuchi評(píng)分為正相關(guān)，相關(guān)性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；TIM-1與IgA免疫熒光分級(jí)呈正相關(guān)，并且相關(guān)性沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)

11、論：
　　1.本研究成功構(gòu)建IgA腎病小鼠模型。
　　2.在IgAN模型組腎臟組織中發(fā)現(xiàn)TIM-1表達(dá)上調(diào)，且與病理損傷程度呈正相關(guān)，但給予anti-TIM-1阻斷TIM-1信號(hào)通路后，TIM-1表達(dá)下調(diào)，與病理損傷程度仍為正相關(guān)，提示在小鼠 IgAN中 TIM-1信號(hào)通路可能參疾病的發(fā)病及進(jìn)展。
　　3. TIM-1與IL-4、IFN-γ的表達(dá)在 IgAN模型組腎組織中表達(dá)都上調(diào)，并且TIM-1與IL-4、IFN-γ

12、均為正相關(guān)，與IFN-γ/ IL-4呈負(fù)相關(guān)，在模型組給與TIM-1抗體處理后，TIM-1與IL-4表達(dá)都下調(diào)，并且TIM-1與IL-4仍為正相關(guān)，與IFN-γ/ IL-4呈負(fù)相關(guān)，這提示在IgAN發(fā)病中Th2優(yōu)勢(shì)反應(yīng)被TIM-1信號(hào)通路調(diào)控。
　　4. MyD88、TLR4、NF-κB的表達(dá)在 IgAN模型小鼠腎組織中的表達(dá)都升高，這提示在 IgA腎病的發(fā)病中 TLR4信號(hào)通路可能發(fā)揮作用。TLR4、MyD88、NF-κB在經(jīng)過