縫隙連接通訊對(duì)腦缺血后星形膠質(zhì)細(xì)胞活化、增殖及分泌的影響.pdf

1、目的:探索縫隙連接蛋白在星形膠質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)分布特點(diǎn),并研究Cx43通道蛋白在氧糖剝奪損傷再灌注過程中的表達(dá)變化規(guī)律。
　　方法:體外培養(yǎng)大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞,利用GFAP免疫熒光染色鑒定純度,并通過免疫熒光染色觀察Cx43縫隙連接蛋白在星形膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)規(guī)律。將純化后的星形膠質(zhì)細(xì)胞隨機(jī)分為正常(對(duì)照)組(培養(yǎng)基為含糖EBSS,置于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱)、OGD組(培養(yǎng)基為不含糖EBSS,置于缺氧培養(yǎng)箱),氧糖剝奪實(shí)驗(yàn)(OGD)1

2、h后,再灌注不同時(shí)間點(diǎn)(0h、3h、6h、12h、24h),應(yīng)用免疫熒光染色和蛋白免疫印跡法檢測對(duì)照組和OGD組Cx43縫隙連接蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:依據(jù)文獻(xiàn)方法純化星形膠質(zhì)細(xì)胞,免疫熒光顯示Cx43通道蛋白呈點(diǎn)狀分布在GFAP陽性的膠質(zhì)細(xì)胞邊緣,且在兩個(gè)細(xì)胞間連接處表達(dá)較多。與正常組相比,OGD干預(yù)1h不會(huì)引起星形膠質(zhì)細(xì)胞活力的改變。Cx43縫隙連接總蛋白和Cx43縫隙連接磷酸化蛋白(P-Cx43)的表達(dá)在OGD干預(yù)后都有所增加

3、。
　　結(jié)論:Cx43在星形膠質(zhì)細(xì)胞胞膜上豐富表達(dá)。OGD誘導(dǎo)Cx43縫隙連接總蛋白和磷酸化蛋白(P-Cx43)的表達(dá)增加。
　　目的:研究氧糖剝奪再灌注后調(diào)控Cx43活性對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞活化、增殖以及分泌功能的影響。
　　方法:將原代培養(yǎng)大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞,隨機(jī)分為正常(對(duì)照)組(培養(yǎng)基為含糖EBSS)、OGD組(培養(yǎng)基為不含糖EBSS)、CBX組(培養(yǎng)基為不含糖EBSS和廣譜縫隙連接通道阻滯劑CBX)和MFA組

4、(培養(yǎng)基為不含糖EBSS和相對(duì)特異性Cx43通道阻滯劑MFA),正常組置于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱,OGD組、CBX組合MFA組置于缺氧培養(yǎng)箱;應(yīng)用LDH釋放試驗(yàn)檢測藥物CBX和MFA的毒性作用;應(yīng)用免疫熒光染色和蛋白免疫印跡法檢測Cx43通道抑制劑對(duì)OGD后再灌注星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響;應(yīng)用BrdU免疫熒光染色檢測Cx43通道抑制劑對(duì)OGD后再灌注星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖的影響;及應(yīng)用谷氨酸試劑盒檢測Cx43通道抑制劑對(duì)OGD后再灌注星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌

5、功能的影響。
　　結(jié)果:與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)所用濃度的縫隙連接通道阻滯劑CBX和MFA不會(huì)引起細(xì)胞凋亡和壞死;與正常培養(yǎng)條件下星形膠質(zhì)細(xì)胞相比,在單純OGD再灌注后,其GFAP免疫活性和表達(dá)量以及BrdU陽性細(xì)胞百分率升高,星形膠質(zhì)細(xì)胞胞體較正常組肥大,突起增多,而OGD后加入CBX和MFA后,其GFAP免疫活性和表達(dá)量以及BrdU陽性細(xì)胞百分率較OGD組下降明顯,星形膠質(zhì)細(xì)胞胞體體積和突起也較OGD組下降明顯,和正常組接近;OGD