Aβ對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖與活化作用的體外研究.pdf

1、現(xiàn)在普遍認(rèn)為阿爾茨海默病（Alzheimer's disease，AD）主要是由大腦特異區(qū)域（包括隔膜）的β淀粉樣蛋白（Aβ）的神經(jīng)毒性蓄積所引起。Aβ由40-42個(gè)氨基酸肽段組成，是淀粉樣前體蛋白（APP）的裂解產(chǎn)物。在AD病人大腦中，活化的星形膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)炎斑塊的基本組成成分，并且含有Aβ碎片。星形膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中數(shù)量最多而且最重要的細(xì)胞，在修復(fù)大腦的正常生理功能中起重要作用，星形膠質(zhì)細(xì)胞功能的紊亂可促使神經(jīng)退變和神經(jīng)元突

2、觸的喪失。但是，星形膠質(zhì)細(xì)胞與AD的確切關(guān)系目前尚不清楚。本研究通過(guò)一系列體外實(shí)驗(yàn)探討了Aβ1-42寡聚體對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖與活化作用的影響，為體內(nèi)進(jìn)一步了解Aβ1-42和星形膠質(zhì)細(xì)胞在AD疾病發(fā)病過(guò)程中的作用提供理論基礎(chǔ)，有利于進(jìn)一步了解AD的發(fā)病機(jī)理。 本研究取新生一天的ICR小鼠的腦，機(jī)械分離大腦皮層，進(jìn)一步分離獲得星形膠質(zhì)細(xì)胞，在體外進(jìn)行培養(yǎng)。原代細(xì)胞大約3-5周成熟。傳代后星形膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)由原漿性向纖維性轉(zhuǎn)變。通過(guò)免

3、疫組化鑒定后，發(fā)現(xiàn)原代星形膠質(zhì)細(xì)胞的純度達(dá)到95％以上。傳代后的星形膠質(zhì)細(xì)胞純度更高。在體外利用聚合后0．1μM、1μM、3μM、10μM、30μM的Aβ1-42寡聚體分別作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞3h、8h、16 h、24 h、48 h。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Aβ1-42寡聚體能夠使星形膠質(zhì)細(xì)胞由原來(lái)的原漿性星形膠質(zhì)細(xì)胞向纖維性轉(zhuǎn)變，同時(shí)隨著Aβ1-42寡聚體濃度增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞的存活率逐漸降低。根據(jù)細(xì)胞存活率結(jié)果，我們進(jìn)一步選取不同濃度（0．

4、1μM、1μM、3μM、10μM、30μM）的Aβ1-42寡聚體分別作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞，分別在8h和48 h，用ELISA法檢測(cè)了星形膠質(zhì)細(xì)胞大腦衍生生長(zhǎng)因子（BDNF）的分泌，通過(guò)RT-PCR法檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）和炎性因子白介素-1β（IL-1β）的表達(dá)狀況。結(jié)果表明，隨著Aβ1-42寡聚體濃度的升高（30μM）和作用時(shí)間的延長(zhǎng)（48 h），星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌的BDNF量增多；而GFAP和IL-1β的表達(dá)