硫化氫對血管緊張素Ⅱ引起的心肌細胞損傷的保護作用及其機制研究.pdf

1、背景：
　　硫化氫（hydrogen sulfide, H2S）是繼一氧化碳(carbon monoxide, CO)和一氧化氮(nitric oxide, NO)之后的第三種新型氣體信號分子，它在體內(nèi)的生理濃度遠遠低于其產(chǎn)生毒性作用的濃度。研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)源性H2S對機體的多種系統(tǒng)具有保護作用，特別是心血管系統(tǒng)， H2S能夠降低血壓、延緩動脈粥樣硬化的發(fā)展、抑制心肌細胞的肥大及緩解心臟的缺血再灌注損傷等。腎素-血管緊張素系統(tǒng)（reni

2、n-angiotensin system, RAS）的過度激活是目前公認的心血管疾病發(fā)生發(fā)展的重要病理機制，其中血管緊張素II（angiotensin-II, Ang II）是該系統(tǒng)中發(fā)揮作用的最主要成員之一，它可以促進血管成纖維細胞、血管平滑肌細胞的增殖和肥大、誘導心肌細胞凋亡并對血液動力學產(chǎn)生重要影響。
　　目前關(guān)于H2S對AngII誘導的心肌細胞損傷的保護作用報道較少，本課題組前期實驗在動物2K1C（tow-kidney a

3、nd one-clip,2K1C）模型上已經(jīng)證實H2S能夠抑制RAS激活引起的左心室肥厚及纖維化的發(fā)生、發(fā)展，并明顯下調(diào)由RAS激活而誘導的AngII受體的表達，其機制與H2S拮抗循環(huán)中以及局部腎素-血管緊張素系統(tǒng)有關(guān)。而AngII是RAS系統(tǒng)發(fā)揮作用的最主要的多功能活性肽，那么在離體狀態(tài)下H2S是否也能減輕AngII誘導的心肌細胞的損傷，其保護機制目前尚不清楚。
　　目的：
　　本研究目的在于觀察離體狀態(tài)下H2S是否能夠減

4、輕AngII誘導的心肌細胞的損傷。分別從細胞活性、細胞內(nèi)活性氧水平、心肌細胞凋亡比例及線粒體膜表面電位等細胞分子水平上，來探討H2S對心肌細胞的保護作用及相關(guān)機制。
　　方法：
　　本實驗先將不同濃度的AngII和H2S分別作用體外培養(yǎng)的H9C2心肌細胞，采用四甲基偶氮唑鹽比色法（MTT法）檢測 H2S和AngII對 H9C2心肌細胞活性的影響，選取出H2S和AngII的最佳實驗濃度；然后H9C2細胞經(jīng)適宜濃度的H2S和An

5、gII處理后，分別采用DCFH-DA染色、Annexin V-FITC/PI染色及JC-1染色法，經(jīng)流式細胞儀來檢測H9C2心肌細胞內(nèi)的活性氧水平、細胞凋亡比例及細胞線粒體膜表面電位情況。
　　結(jié)果：
　　1. Ang II（10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L,24小時)組與對照組（單純培養(yǎng)基）相比，心肌細胞活性無明顯差異（P>0.05）；作用時間延長至48小時，Ang II（10-6、10-5 m

6、ol/L）組 H9C2心肌細胞的活性明顯下降（P<0.05）。并且 H2S（50μmol/L)+Ang II（10-6mol/L）組較Ang II（10-6mol/L）組H9C2心肌細胞活性顯著提高（P<0.05）。
　　2. Ang II（10-6mol/L，48小時）組與對照組相比心肌細胞內(nèi)活性氧明顯增加；H2S（10、50、100μmol/L預作用30min）均不同程度的逆轉(zhuǎn)Ang II(10-6mol/L)引起的心肌細胞內(nèi)

7、活性氧增加；且H2S（100μmol/L）+Ang II（10-6mol/L）組與Ang II（10-6mol/L）組相比，心肌細胞內(nèi)活性氧明顯下降（P<0.05）。
　　3.與對照組相比，Ang II（10-6mol/L）組心肌細胞凋亡率明顯增加（P<0.05）；且 H2S（50μmol/L、100μmol/L）+Ang II（10-6mol/L）組與AngII（10-6mol/L）相比，心肌細胞凋亡率均顯著下降（P<0.05）

8、；H2S（50μmol/L）組較陰性對照組心肌細胞凋亡率未見明顯改變。
　　4.較對照組，Ang II（10-6mol/L）組心肌細胞線粒體膜電位明顯下降（P<0.05）；但H2S（50μmol/L）+Ang II（10-6mol/L）組與Ang II（10-6mol/L）組相比，心肌細胞線粒體膜表面電位未見明顯改變（P>0.05）；H2S（50μmol/L）未能逆轉(zhuǎn) Ang II（10-6mol/L）引起的心肌細胞線粒體膜電位的