某地區(qū)獻(xiàn)血員及白血病患者中隱匿性乙型肝炎病毒感染的分子流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、目的:了解某地區(qū)獻(xiàn)血員及HBsAg陰性的白血病患者中隱匿性HBV感染的檢出率,并探討其與研究對(duì)象年齡、性別、生化學(xué)檢測(cè)結(jié)果以及乙型肝炎病毒標(biāo)志物之間的關(guān)系,同時(shí)從S基因變異角度探討隱匿性HBV感染可能的分子機(jī)制。
　　方法:①病例選擇和標(biāo)本收集:收集2010年6月~2010年9月間經(jīng)某地區(qū)血站篩查HBsAg陰性的合格獻(xiàn)血員血漿594份。另收集2010年9月~2010年10月間某地區(qū)三甲醫(yī)院檢驗(yàn)科檢驗(yàn)結(jié)果為HBsAg、抗-HBc定量

2、檢測(cè)雙陽(yáng)性且HBV DNA陽(yáng)性的HBV感染者做對(duì)照。87份HBsAg陰性的白血病患者血清標(biāo)本均來(lái)自2010年8月至2010年12月間在某地區(qū)三甲醫(yī)院血液科確診為白血病的患者(包括急性及慢性白血病患者)。②HBV DNA提取:采用經(jīng)典蛋白酶K消化-酚/氯仿法。③巢式PCR法檢測(cè)HBV DNA:參考國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)及HBV參照序列,在HBV基因組S、C、X區(qū)分別設(shè)計(jì)一對(duì)巢式引物。巢式PCR擴(kuò)增,當(dāng)任兩個(gè)區(qū)同時(shí)陽(yáng)性者定義為隱匿性HBV感染者。④雅培

3、Architect I2000R電化學(xué)發(fā)光儀定量檢測(cè)隱匿性HBV感染者的HBV血清學(xué)標(biāo)志物,對(duì)隱匿性HBV感染者與非感染者進(jìn)行性別、年齡、生化學(xué)檢測(cè)結(jié)果以及HBV血清標(biāo)志物等的比較。⑤擴(kuò)增HBV DNA陽(yáng)性者小S區(qū)測(cè)序:根據(jù)HBV參照序列,在S區(qū)設(shè)計(jì)引物,對(duì)隱匿性HBV感染者以及11例HBsAg和抗-HBc雙陽(yáng)性的HBV感染者進(jìn)行擴(kuò)增測(cè)序,并進(jìn)行基因型、HBsAg“α”決定簇突變分析,發(fā)現(xiàn)可能和隱匿性HBV感染有關(guān)的變異位點(diǎn)。
　

4、　結(jié)果:一、獻(xiàn)血員:①在594例獻(xiàn)血員中有15例為隱匿性HBV感染,隱匿性HBV感染的發(fā)生率為2.5％(15/594)。未發(fā)現(xiàn)HBV血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果與隱匿性HBV感染有相關(guān)性。②將獻(xiàn)血員中隱匿性HBV感染者和陽(yáng)性對(duì)照ⅠS區(qū)的測(cè)序序列與HBV標(biāo)準(zhǔn)序列相比較,結(jié)果共檢測(cè)到2種基因型(HBV/B, HBV/C),其中HBV/B基因型占優(yōu)勢(shì),10例隱匿性HBV感染者HBV基因型分別為HBV/B(9例),HBV/C(1例),而11例陽(yáng)性對(duì)照Ⅰ

5、HBV基因型分別為HBV/B(10例),HBV/C(1例)。隱匿性HBV感染者和陽(yáng)性對(duì)照Ⅰ相比較,兩者的基因型分布并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③獻(xiàn)血員中,15例隱匿性HBV感染者中共10人有S區(qū)測(cè)序結(jié)果,其HBV DNA均有不同程度的變異,其中共有3例在“a”決定簇內(nèi)出現(xiàn)氨基酸突變,分別為I126T(1例)、T140I(2例)。與隱匿性HBV感染者相比,陽(yáng)性對(duì)照Ⅰ在“a”決定簇內(nèi)僅出現(xiàn)了1例T131N變異。
　　二、白血病:①在87例HBsA

6、g陰性的白血病中,隱匿性感染者有15例,隱匿性 HBV感染的檢出率為17.2%(15/87)。實(shí)驗(yàn)組的年齡、性別分布、生化學(xué)檢測(cè)結(jié)果等與對(duì)照組相比,差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②在白血病患者中隱匿性HBV感染的抗-HBc陽(yáng)性的檢出率(46%,7/15)顯著高于對(duì)照組中抗-HBc陽(yáng)性檢出率(9.7%,7/72)(χ2=12.548, P﹤0.001),即在白血病患者中抗-HBc陽(yáng)性與否,與隱匿性感染有顯著相關(guān)性。③白血病患者中隱匿性 HBV感染者共

7、檢測(cè)到2種基因型(HBV/B, HBV/C),其中HBV/C基因型占優(yōu)勢(shì),11例隱匿性HBV感染者HBV基因型分別為HBV/C(10例),HBV/B(1例),與獻(xiàn)血員中隱匿性HBV感染者的測(cè)序結(jié)果差別較大。④白血病中,15例隱匿性HBV感染者中共11人有S區(qū)測(cè)序結(jié)果,其中1例隱匿性HBV感染者出現(xiàn)了插入突變,另2例提前形成終止密碼,形成縮短的氨基酸序列,并有6例有氨基酸突變存在。在不同基因型的隱匿性HBV感染者中,在MHR區(qū)存在變異的5

8、例基因型C病毒株均發(fā)生了I126T變異,而唯一1例基因型B病毒株發(fā)生的是Q129R、D144E、S155Y聯(lián)合變異。
　　結(jié)論:①在本地區(qū)獻(xiàn)血員及HBsAg陰性的白血病患者中隱匿性HBV感染的檢出率分別為2.5%和17.2%。②在白血病患者中,抗-HBc陽(yáng)性與隱匿性HBV感染有明顯的相關(guān)性。③白血病患者中隱匿性HBV感染者與本地區(qū)慢性HBV感染者基因型有顯著不同。④HBV S區(qū)基因變異尤其是HBsAg“α”決定簇存在氨基酸改變可能