隱匿性乙型肝炎病毒感染：HBV基因變異分析.pdf

1、目的：臨床上約5％～10％慢性肝病患者依據(jù)臨床表現(xiàn)、生化及血清學(xué)檢查仍不能明確病因，其中一部分忠者通過(guò)肝穿刺活檢和(或)血清HBVDAN檢測(cè)，確診為隱匿性HBV感染(OccultHepatitisBvirusinfection)。我國(guó)是乙型肝炎的高發(fā)區(qū)，對(duì)隱匿性乙型肝炎應(yīng)引起重視。為此，本課題研究一組不明原因性肝炎患者隱匿性HBV感染情況并從基因變異角度研究HBV隱匿性感染的分子機(jī)制。 方法：(1)病歷選擇和血清收集：不明原因性

2、肝炎患者104例，收集臨床資料并清晨空腹靜脈采血。(2)模板制備：分別用直接煮沸法、辛酸鈉法、蛋白酶K消化-酚-氯仿法、PEG8000法、辛酸鈉-酚-氯仿法、堿裂解法、柱抽提法，抽提血清中HBVDNA，比較各抽提方法的目的基因得率、靈敏度及重復(fù)性。尋找適合于HBV隱匿性感染模板制備方法。(3)引物設(shè)計(jì)：HBV基因組不同區(qū)段分別設(shè)計(jì)2套巢式引物，比較擴(kuò)增效率，選擇擴(kuò)增效率高的引物。(4)巢式PCR擴(kuò)增，查出隱匿性HBV感染者。(5)HBV

3、S、X區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序和變異位點(diǎn)分析，發(fā)現(xiàn)可能和HBV隱匿性感染有關(guān)的變異位點(diǎn)。 結(jié)果：(1)在7種不同的抽提方法中，辛酸鈉-酚-氯仿法在目的基因得率、靈敏度、重復(fù)性方面均優(yōu)于其它方法。(2)104例不明原因性肝炎患者中查出隱匿性HBV感染13例。(3)S基因區(qū)未發(fā)現(xiàn)有義突變，X基因區(qū)及重疊核心啟動(dòng)子區(qū)、增強(qiáng)子Ⅱ區(qū)發(fā)現(xiàn)多位點(diǎn)變異，可能與HBV隱匿性感染有關(guān)。 結(jié)論：辛酸鈉-酚-氯仿法在隱匿性HBV感染DNA檢測(cè)中有較好的效