血透患者中隱匿性乙型肝炎病毒感染的分子流行病學分析.pdf

1、目的:了解HBsAg陰性的維持性血液透析患者中隱匿性HBV感染的檢出率,探討其與研究對象性別、年齡、HBV血清標志物、抗-HCV、透析時間等的相關(guān)性。同時隨機選取HBsAg陽性血透患者作為對照,從S基因變異角度探討隱匿性HBV感染可能的分子機制。
　　方法:①病例選擇和標本收集:102份HBsAg陰性的維持性血液透析患者血清標本均來自2009年12月至2010年4月在安徽省合肥市數(shù)家三甲醫(yī)院的血液凈化中心長期透析患者。另從上述血透

2、中心中隨機選取7例HBsAg陽性的維持性血透患者作為對照。②雅培Architect I2000R電化學發(fā)光儀定量檢測HBV血清學標志物。③HBV DNA提取:采用經(jīng)典蛋白酶K消化-酚/氯仿法。④巢式PCR法檢測HBV DNA:參考國內(nèi)外文獻及HBV參照序列,在HBV基因組S、C、X區(qū)分別設(shè)計一對巢式引物。巢式PCR擴增,當任兩個區(qū)同時陽性者定義為隱匿性HBV感染者。對隱匿性HBV感染者與非感染者進行性別、年齡、HBV血清標志物、抗-HC

3、V、透析時間等的比較。⑤擴增HBV DNA陽性者小S區(qū)測序:根據(jù)HBV參照序列,在S區(qū)設(shè)計引物,對隱匿性HBV感染者以及7例HBsAg陽性的血透患者進行擴增測序,并進行基因型、HBsAg“α”決定簇突變分析,發(fā)現(xiàn)可能和HBV隱匿性感染有關(guān)的變異位點。
　　結(jié)果:①102份經(jīng)ELISA法初篩的HBsAg陰性血清經(jīng)ECLIA法證實HBsAg均為陰性,巢式PCR檢測出2個區(qū)同時陽性者有8例(包括3個區(qū)同時陽性者),即共檢測到8例隱匿性H

4、BV感染者,即HBsAg陰性的血透患者中隱匿性HBV感染的檢出率約為7.8％。②將8例隱匿性HBV感染者作為實驗組,94例HBsAg陰性、HBV DNA陰性者作為對照組。實驗組的年齡、性別分布、透析時間等與對照組相比,差別無統(tǒng)計學意義。在抗-HCV陽性與陰性的血透患者中,隱匿性HBV感染的檢出率分別為16.7%和6.7%,差異亦無統(tǒng)計學意義。除了單一抗-HBc陽性外,各種HBV感染的血清學模式在實驗組與對照組中都無明顯差異。在單一抗-H

5、Bc陽性的血透患者中隱匿性HBV感染的檢出率(30.8%,4/13)顯著高于非單一抗-HBc陽性的血透患者隱匿性HBV感染的檢出率(4.5%,4/89)(χ2=7.504,P﹤0.01),即在血透患者中隱匿性HBV感染更常發(fā)生于單一抗-HBc陽性者。③成功擴增測序的6例隱匿性HBV感染者病毒株中2例為B基因型,4例為C型,7例HBsAg陽性的維持性血透患者均為B基因型。分別對兩組患者進行S區(qū)核苷酸和氨基酸的同源性分析,結(jié)果顯示隱匿性HB

6、V感染者S區(qū)的核苷酸替換率為0.15%-4.26%,氨基酸替換率為0.44%-9.73%,而陽性對照的核苷酸替換率為0.73%-1.17%,氨基酸替換率為1.77%-2.65%。④6例隱匿性HBV感染者中共有3例在HBsAg“α”決定簇出現(xiàn)了氨基酸突變,2例聯(lián)合突變均發(fā)生在基因C型病毒株中,分別為Q129P/T131N/S143T/G145S,Q129P/T131N/D144V/G145S;而7例基因B型的HBsAg陽性血液透析患者“α

7、”決定簇區(qū)域內(nèi)未見突變。
　　結(jié)論:①在本地區(qū)HBsAg陰性的維持性血液透析患者中隱匿性HBV感染的檢出率約為7.8%,在單一抗-HBc陽性的研究對象中隱匿性HBV感染的檢出率較高(30.8%)。②維持性血液透析患者中隱匿性HBV感染的存在與抗-HCV陽性與否并無相關(guān)性,而與單項抗-HBc的陽性率顯著相關(guān)。對血透人群進行隱匿性HBV感染的檢測,尤其對于單一抗-HBc陽性者具有十分重要的臨床意義。③HBVS區(qū)基因變異尤其是HBsAg