兒童急性白血病的實(shí)驗(yàn)及臨床回顧性研究.pdf

1、第一部分
　　 目的:小檗堿（BBR）又名黃連素，近年來(lái)的藥理學(xué)研究顯示出其具有良好的抗腫瘤作用。先前的研究表明，小檗堿可協(xié)同TRAIL 誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡，且其分子機(jī)制可能涉及抑制NF-κB/P65表達(dá)和caspase3，caspase8 剪切活化。但是尚不清楚其他基因如P53或者M(jìn)DM2是否參與小檗堿的這種作用。而Survivin是近年來(lái)研究較為熱門(mén)的凋亡抑制蛋白家族成員之一，具有抑制凋亡、調(diào)節(jié)分化的雙向作用，在正常的人體組

2、織細(xì)胞幾乎不表達(dá)。近年來(lái)又發(fā)現(xiàn)survivin的異構(gòu)體survivin-2B和survivin-△Ex3 對(duì)于癌癥發(fā)生和發(fā)展中的生物學(xué)功能和作用與survivin 并不一致。而survivin 及異構(gòu)體與MDM2、P53 之間的相互作用機(jī)制也不清楚。因此本研究的目的：1、小檗堿對(duì)Jurkat細(xì)胞的增殖、凋亡的影響及其分子生物學(xué)機(jī)制；2、小檗堿對(duì)Jurkat細(xì)胞的作用機(jī)制是否不同于傳統(tǒng)化療藥物柔紅霉素。
　　 方法:培養(yǎng)Jurka

3、t細(xì)胞分為:（1）空白對(duì)照組；（2）小檗堿組（25μM、50μM、100μM）；（3）柔紅霉素對(duì)照組（0.1mg/L，1mg/L，10 mg/L）；分別培養(yǎng)12、24h后取樣本用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。利用CCK-8 法檢測(cè)小檗堿及柔紅霉素對(duì)每組Jurkat細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率；同時(shí)采用流式細(xì)胞術(shù)AnnexinⅤ/PI 染色法檢測(cè)其誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞凋亡的影響。用Real-time PCR及Western-blot 方法檢測(cè)小檗堿及柔紅霉素作用Jur

4、kat細(xì)胞后Survivin 及其異構(gòu)體Survivin-2B和Survivin-△Ex3與MDM2、P53基因表達(dá)mRNA與蛋白的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1、小檗堿具有明顯抑制Jurkat細(xì)胞增殖并促進(jìn)其凋亡的作用，其作用具有濃度依賴(lài)性與時(shí)間依賴(lài)性，呈現(xiàn)出隨濃度增加和作用時(shí)間延長(zhǎng)表現(xiàn)出明顯增加的抑制率和凋亡率，與柔紅霉素作用Jurkat細(xì)胞所表現(xiàn)的的趨勢(shì)一致。
　　 2、小檗堿抑制Survivin 及其異構(gòu)

5、體Survivin-△Ex3的表達(dá)，促進(jìn)Survivin-2B表達(dá)，具有時(shí)間依賴(lài)性和濃度依賴(lài)性，柔紅霉素也表現(xiàn)出時(shí)間依賴(lài)性與濃度依賴(lài)性；但是二者的作用并不同步。
　　 3、小檗堿促進(jìn)P53表達(dá)，表現(xiàn)出與柔紅霉素一致的時(shí)間依賴(lài)性，但是對(duì)于濃度依賴(lài)性二者表達(dá)并不一致。
　　 4、小檗堿抑制MDM2的表達(dá)，表現(xiàn)出時(shí)間依賴(lài)性，沒(méi)有濃度依賴(lài)性；而柔紅霉素抑制MDM2表達(dá)表現(xiàn)出不完全時(shí)間依賴(lài)性和濃度依賴(lài)性。
　　 結(jié)論:小檗

6、堿作用Jurkat細(xì)胞后通過(guò)下調(diào)Survivin、Survivin-△Ex3、MDM2的表達(dá)，上調(diào)Survivin-2B、P53的表達(dá)從而抑制其增殖并促進(jìn)凋亡，呈不完全的時(shí)間依賴(lài)性和濃度依賴(lài)性，與柔紅霉素作用機(jī)制并不一致，提示小檗堿治療對(duì)柔紅霉素耐藥的白血病細(xì)胞，或者與柔紅霉素聯(lián)合治療白血病可能具有一定的臨床價(jià)值。
　　 第二部分
　　 背景:21-三體異常的新生兒大約有10％可能會(huì)出現(xiàn)一過(guò)性骨髓增殖異常（TAM），表現(xiàn)

7、為在出生后的最初的數(shù)天時(shí)間內(nèi)外周血出現(xiàn)并迅速積聚大量的原始細(xì)胞，并可能在數(shù)周至數(shù)月內(nèi)自行消失。其中20~30％的患兒在今后數(shù)年內(nèi)繼發(fā)急性巨核細(xì)胞白血?。ˋMKL)。
　　 目的:探索中國(guó)新生兒21-三體染色體異常合并一過(guò)性骨髓增殖異常的自然病程，以及繼發(fā)性AMKL的臨床特征、治療方法與長(zhǎng)期預(yù)后。
　　 方法:回顧性分析了在香港大學(xué)李嘉誠(chéng)醫(yī)學(xué)院瑪麗醫(yī)院收治并隨訪(fǎng)的4 名21-三體異常合并一過(guò)性骨髓增殖異常的新生兒。

8、　　 結(jié)果:21-三體是這4例TAM 病人原始細(xì)胞唯一確認(rèn)的染色體異常。4 名病人均在未接受化療、僅接受對(duì)癥治療后外周血原始細(xì)胞自行消失，血細(xì)胞計(jì)數(shù)同時(shí)恢復(fù)正常。有3 名病人繼發(fā)AMKL，其診斷為AMKL的平均年齡為15個(gè)月；他們均接受了化療治療。這3名病人均維持至少6年的完全緩解。另外一名未繼發(fā)AMKL的病人僅在其原始細(xì)胞中確定為21-三體的染色體異常，在其外周血原始細(xì)胞消失后體細(xì)胞和白細(xì)胞均未再發(fā)現(xiàn)染色體異常，這名病人也不具有典型

9、Down’s 綜合癥的外貌。
　　 結(jié)論:4 名TAM 病人盡管只接受對(duì)癥支持治療，仍然取得完全緩解，無(wú)1例死亡，其預(yù)后要優(yōu)于文獻(xiàn)報(bào)道類(lèi)似疾病的病人預(yù)后。未來(lái)的研究將著重于額外的21 號(hào)染色體上特定基因在誘發(fā)TAM及可能繼發(fā)AMKL中的作用機(jī)制以及可能針對(duì)這些特定基因的靶向治療；同時(shí)需要多中心合作研究以制定針對(duì)中國(guó)新生兒TAM以及繼發(fā)AMKL的區(qū)分危險(xiǎn)度的個(gè)體化治療方案，以期在確保治療效果的同時(shí)盡可能減少治療相關(guān)性毒副作用。

10、r>　　 1、嬰兒急性白血病的臨床分析
　　 目的:探討嬰兒白血病（IAL）的臨床表現(xiàn)、細(xì)胞遺傳學(xué)及分子生物學(xué)檢查的特點(diǎn)。
　　 方法:對(duì)2005年1月1日～2009年12月31日華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院和武漢市兒童醫(yī)院初診的30例IAL 患兒的臨床特征及實(shí)驗(yàn)室檢查資料進(jìn)行回顧性分析。
　　 結(jié)果:發(fā)熱 14例，皮膚出血 5例，面色蒼白、面色蒼黃各4例。肝和（或）脾超過(guò)肋下5cm 4例；全身淺表淋巴結(jié)

11、腫大8例；雙腎腫大2例；骨質(zhì)破壞5例；中樞神經(jīng)系統(tǒng)浸潤(rùn)1例，病程2~75d。WBC 為 (1.06~681.37，中位數(shù)114.78)×109/L ；外周血涂片均可見(jiàn)幼稚細(xì)胞；Hb （38~101，中位數(shù)67）g/L； PLT（1~355，中位數(shù)61）×109/。30例IAL患兒中ALL 15例，ANLL 14例，分類(lèi)不明1例。12例獲得免疫表型檢查結(jié)果，5例ALL均為B 系，其中CD10表達(dá)3例； CD7與CD15共同表達(dá)1例；7例A

12、ML中CD19表達(dá)2例。12例獲得染色體檢查結(jié)果，其中3例異常。有13例IAL 行融合基因檢測(cè)，結(jié)果E2A/PBX1、BCR/ABL 陽(yáng)性各1例。30例中僅4例ALL 接受化療，但最終均放棄治療。而對(duì)未治療的26例4周后電話(huà)隨訪(fǎng)均死亡。
　　 結(jié)論:IAL 病人在臨床特征、免疫分型及遺傳學(xué)等方面并沒(méi)有表現(xiàn)出特異性。并且由于絕大多數(shù)IAL 病人未得到有效化療而導(dǎo)致其預(yù)后較年長(zhǎng)兒為差。但本研究樣本量較少，關(guān)于IAL 病人化療方案的制

13、定及其長(zhǎng)期預(yù)后仍然需要多中心協(xié)作研究解決。
　　 2、中國(guó)青少年急性淋巴細(xì)胞白血病采用兒童化療方案治療的長(zhǎng)期效果
　　 研究背景:10～18 歲青少年急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL)患者使用兒童化療方案的治療效果明顯優(yōu)于成人化療方案，這表明非骨髓抑制化療藥物的強(qiáng)化治療和更密集的鞘注治療在改善青少年ALL 患者預(yù)后的重要性。
　　 目的:明確中國(guó)青少年ALL 患者的生物學(xué)特點(diǎn)和臨床特征，以及使用兒童化療方案治療的長(zhǎng)期效

14、果。
　　 方法:對(duì)在香港大學(xué)李嘉誠(chéng)醫(yī)學(xué)院瑪麗醫(yī)院使用兒童化療方案治療并隨訪(fǎng)的19 名10～18歲青少年ALL 患者進(jìn)行回顧性分析。
　　 結(jié)果:總共10 名男性和9 名女性患者接受了治療。4例患者初診時(shí)外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)＞100×109/L。4例免疫表型為T(mén)-ALL，其余為B-ALL。10例患者確定存在細(xì)胞遺傳學(xué)異常?？诜娔崴芍委?天后15例患者反應(yīng)良好。治療第33天骨髓檢查有2例沒(méi)有緩解。盡管有84％（16/19）的

15、患者獲得完全緩解（Complete Remission，CR)，但是有9例出現(xiàn)嚴(yán)重的治療相關(guān)性毒副作用，其中2例死亡。4例復(fù)發(fā)，從CR 到復(fù)發(fā)的平均時(shí)間為35個(gè)月（10~63個(gè)月）。平均隨訪(fǎng)時(shí)間為88個(gè)月（5~150個(gè)月）。7年總體生存率（OS）和無(wú)事件生存率（EFS）分別為89.5±7.0％和72.9±10.4％。
　　 結(jié)論:盡管青少年ALL 患者使用兒童化療方案可能出現(xiàn)較明顯的治療相關(guān)性毒副作用，但是其長(zhǎng)期預(yù)后令人滿(mǎn)意，并

16、且不需要常規(guī)接受造血干細(xì)胞移植。
　　 3、造血干細(xì)胞移植在中國(guó)嬰兒難治性和/或復(fù)發(fā)性急性白血病治療中的作用
　　 研究背景:即使多藥聯(lián)合化療配合造血干細(xì)胞移植（HSCT)治療難治性/復(fù)發(fā)性白血病使得兒童白血病的長(zhǎng)期預(yù)后獲得明顯改善，但是嬰兒難治性和/或復(fù)發(fā)性白血病對(duì)于現(xiàn)有的化療方案并沒(méi)有從中明顯受益，而HSCT是否有助于改善這一群體的預(yù)后并不清楚。
　　 目的:探討HSCT在改善中國(guó)難治性和/或復(fù)發(fā)性嬰兒急性白

17、血病的長(zhǎng)期預(yù)后中的作用。
　　 方法:回顧性分析8 名難治性和/或復(fù)發(fā)性嬰兒急性白血病接受HSCT的治療效果。
　　 結(jié)果:8 名病人中4 名病人為急性髓系白血?。ˋML），2 名為急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL），1 名幼年型單核細(xì)胞白血?。↗MML），1 名混合白血?。╩ixed lineage leukemia）。4名病人初診時(shí)的白細(xì)胞（WBC）計(jì)數(shù)＞50×109/L。2 名病人檢測(cè)出MLL基因陽(yáng)性。4 名病人接受了相

18、關(guān)供體HSCT，3 名接受了無(wú)相關(guān)供體臍血移植，1 名接受了無(wú)相關(guān)供體HSCT。8 名病人中有7 名病人移植后中性粒細(xì)胞成功植入，其植入的平均時(shí)間為17天。4 名病人移植后復(fù)發(fā)，盡管其中2 名病人接受第2 次移植，但是這4 名病人全部死亡。另有1 名病人死于移植相關(guān)性并發(fā)癥。8 名病人對(duì)移植的耐受性并不好。4名病人移植后出現(xiàn)4 級(jí)急性移植物抗宿主病（GVHD）。5名病人出現(xiàn)肝靜脈阻塞綜合癥（VOD）。3 名存活的病人全部存在長(zhǎng)期后遺癥和