臍帶間充質干細胞對急性肝衰竭的修復及移植途徑的優(yōu)化.pdf

1、目的:探討臍帶間充質干細胞對急性肝衰竭大鼠的治療作用，并優(yōu)化移植治療途徑。
　　方法:采用組織塊貼壁法收集hUCMSCs，流式細胞術檢測細胞表面標志物。清潔級健康SD大鼠48只（6-8周齡，體重180-220g，雌雄不論），采用完全隨機對照法均分為4組:經尾靜脈注射移植治療組，經肝葉注射移植治療組，模型對照組，空白對照組。急性肝衰竭動物模型采用一次性腹腔注射2.5 ml/kg CCL4橄欖油(1∶1)混合溶液建立，24 h后移植治

2、療組分別經尾靜脈和肝葉注射hUCMSCs細胞懸液;治療后0h、24 h、48h、72 h、96 h和1w收集血清分析肝功能恢復情況;治療后3d、1w、2w留取肝臟標本，觀察病理學恢復情況，用Real-time PCR檢測鼠肝中人CK8、CK18和AFP基因mRNA轉錄水平，免疫組化法檢測人CK18的表達。
　　結果:
　　1、hUCMSCs通過貼壁培養(yǎng)法能成功從臍帶中分離并在體外大量擴增，流式細胞儀鑒定符合MSCs表面標志物

3、特性。
　　2、肝功能和肝臟病理學結果顯示:移植治療組肝功能指標TBil和ALT含量較模型對照組有明顯恢復(P＜0.05)，肝細胞再生程度提高，炎細胞減少，肝臟病理學修復作用增強。
　　3、Real-time PCR結果顯示:在造模后1w、2w時，經尾靜脈移植治療組和經肝葉注射移植治療組的肝組織中，CK8、CK18和AFP基因mRNA的相對轉錄量與模型對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，提示轉錄量明顯增加。
　

4、　4、免疫組化結果提示:經肝葉注射移植治療組和經尾靜脈移植治療組中，移植后的hUCMSCs在鼠肝中誘導分化后表達人肝細胞相關蛋白CK18，隨移植時間的延長，分化后的細胞從匯管區(qū)向中央靜脈區(qū)遷移擴散。
　　5、經尾靜脈和經肝葉注射移植治療組的肝功能、移植細胞分化程度比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　結論:
　　1、貼壁培養(yǎng)法能從臍帶中成功分離培養(yǎng)出hUCMSCs。
　　2、采用hUCMSCs移植治療急性肝