過表達(dá)CXCR4的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植修復(fù)脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　建立大鼠急性脊髓損傷模型，通過尾靜脈途徑移植過表達(dá)CXCR4的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(CXCR4-hUC-MSCs)，觀察CXCR4-hUC-MSCs在體內(nèi)的遷移情況，并通過行為學(xué)和組織學(xué)的觀察，評(píng)價(jià)CXCR4-hUC-MSCs在修復(fù)脊髓損傷中起到的效果，探討CXCR4-hUC-MSCs在細(xì)胞遷移及其在脊髓損傷修復(fù)中的機(jī)制。
　　方法:
　　1.體內(nèi)進(jìn)行CXCR4的時(shí)空分布研究:用IMPACTOR MODEL-

2、Ⅱ打擊器制作雌性Wistar大鼠胸10脊髓損傷模型，用免疫組織化學(xué)的方法在不同部位不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)CXCR4的表達(dá)量，來確定體內(nèi)移植細(xì)胞的最佳時(shí)間點(diǎn)。
　　2.觀察體內(nèi)CXCR4-hUC-MSCs的遷移情況:制作IMPACTOR MODEL-Ⅱ大鼠急性脊髓損傷模型，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為3組，局部注射空病毒hUC-MSCs組，尾靜脈注射空病毒組，尾靜脈注射CXCR4-hUC-MSCs組。除局部注射組外，通過尾靜脈途徑移植的方式注入大鼠體內(nèi)，

3、利用免疫熒光的方法觀察局部GFP的情況。
　　3.觀察CXCR4-hUC-MSCs遷移對(duì)大鼠急性脊髓損傷的修復(fù)情況:將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為5組:假手術(shù)組，單純損傷組，局部注射移植單純hUC-MSCs組，尾靜脈注射空病毒組，尾靜脈移植CXCR4-hUC-MSCs組，造模成功后通過BBB評(píng)分對(duì)大鼠的后肢功能恢復(fù)情況進(jìn)行評(píng)價(jià)。8周后處死動(dòng)物，將損傷段脊髓行5um石蠟組織切片后，進(jìn)行HE染色、TUNEL染色，NF-200、GFAP免疫組織化學(xué)染色

4、。綜合以上數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:
　　1.CXCR4在大鼠急性脊髓損傷后的第3天表達(dá)達(dá)到高峰，從而將損傷后第3天作為體內(nèi)細(xì)胞移植的最佳時(shí)間點(diǎn)。
　　2.體內(nèi)通過免疫熒光的實(shí)驗(yàn)方法，驗(yàn)證了脊髓損傷部位可見遷移的CXCR4-hUC-MSCs。
　　3.尾靜脈移植CXCR4-hUC-MSCs組與對(duì)照組相比，大鼠BBB評(píng)分顯著高于對(duì)照組(p＜0.05)，HE染色顯示脊髓損傷后的空洞明顯小于對(duì)照組(p＜0.05)

5、，TUNEL染色顯示細(xì)胞凋亡率明顯小于對(duì)照組(p＜0.05)，GFAP染色顯示膠質(zhì)瘢痕面積小于對(duì)照組(p＜0.05)，NF-200免疫組化染色顯示軸突生長(zhǎng)情況明顯好于對(duì)照組(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.CXCR4在大鼠脊髓損傷中可以促進(jìn)hUC-MSCs的遷移，尾靜脈移植CXCR4-hUC-MSC具有靶向性遷移作用，能夠達(dá)到脊髓損傷部位。
　　2.選擇合適的細(xì)胞移植時(shí)間點(diǎn)可以使得CXCR4-hUC-MSC更容易