CTLA4-Ig融合蛋白對小鼠病毒性心肌炎作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的: 探討CTLA4-Ig融合蛋白對小鼠病毒性心肌炎的作用及其分子調(diào)控機(jī)制。 方法: 選用106只4周齡健康雄性Balb/c小鼠，隨機(jī)分為CTLA4-Ig組16只、病毒組40只、IgG組40只及正常對照組10只。CTLA4-Ig組、病毒組及IgG組小鼠腹腔接種0.15mLTCID50為109/mL的CVB3 Nancy株病毒液，正常對照組小鼠腹腔接種不含病毒的等量Eagle氏液。CTLA4-Ig組和IgG組的小

2、鼠均于接種后6小時、72小時分別腹腔注射CTLA4-Ig0.1mg/kg和非特異性小鼠IgG0.1mg/kg。接種病毒后第7天處死所有小鼠，取外周血，應(yīng)用ELISA法檢測血清IL-2、IFN-γ及IL-4的水平；取心臟，采用HE染色，在光鏡下觀察心肌病理變化并計算心肌病理積分，同時采用半定量RT-PCR法檢測心肌組織中IL-2、IFN-γ、IL-4及CVB3mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果; 1.Balb/c小鼠接種CVB3后

3、，心肌炎的發(fā)病率為100％。光鏡下可見心肌細(xì)胞變性、壞死和部分心肌纖維斷裂，大量炎細(xì)胞浸潤，呈現(xiàn)典型的病毒性心肌炎改變。 2.CTLA4-Ig組小鼠的死亡率(50％)明顯低于病毒組小鼠(80％)及IgG組小鼠(77.5％)(p均<0.05)，心肌病理積分(1.61±0.12)亦明顯低于病毒組小鼠(2.98±0.18)及IgG組小鼠(2.86±0.20)(p均<0.01)。 3.CTLA4-Ig組、病毒組及IgG組的小鼠心

4、肌組織中CVB3mRNA的表達(dá)水平與心肌病理積分呈正相關(guān)(r=0.78,p<0.01)。 4.病毒組小鼠血清IFN-γ水平(196.3±18.8)明顯高于正常對照組小鼠(26.2±8.5)(p<0.01)，IL-4水平(50.8±7.8)明顯低于正常對照組小鼠(146.5±15.2)(p<0.01)，兩組小鼠間IL-2水平無統(tǒng)計學(xué)差異p>0.05)。 5.CTLA4-Ig組小鼠血清IFN-γ水平(32.5±7.6)明顯低

5、于病毒組小鼠(196.3±18.8)與IgG組小鼠(54.6±6.5)(p均<0.01)，而IL-4水平(117.6±17.3)明顯高于病毒組小鼠(50.8±7.8)與IgG組小鼠(51.9±9.5)(p均<0.01)，三組小鼠間IL-2水平無統(tǒng)計學(xué)差異(p均>0.05)。 6.CTLA4-Ig組、病毒組及IgG組的小鼠血清IFN-γ水平與心肌病理積分呈正相關(guān)(r=0.65，p<0.01)，血清IL-4水平與心肌病理積分呈負(fù)相關(guān)

6、(r=-0.89，p<0.01)，血清IL-2水平與心肌病理積分無明顯相關(guān)性(r=0.18,p>0.05)。 7.病毒組小鼠心肌組織中IL-2 mRNA的表達(dá)水平(0.56±0.17)明顯高于正常對照組小鼠(0)(p<0.01)，IFN-γmRNA的表達(dá)水平(1.18±0.13)明顯高于正常對照組小鼠(0.23±0.07)(p<0.01)，而IL-4 mRNA的表達(dá)水平(0.13±0.02)明顯低于正常對照組小鼠(0.46±0.

7、15)(p<0.01)。 8.CTLA4-Ig組小鼠心肌組織中IL-2 mRNA的表達(dá)水平(0.28±0.10)明顯低于病毒組小鼠(0.56±0.17)及IgG組小鼠(0.54±0.13)(p均<0.01)，IFN-γmRNA的表達(dá)水平(0.64±0.18)明顯低于病毒組小鼠(1.18±0.31)及IgG組小鼠(1.14±0.27)(P均<0.01)，IL-4 mRNA的表達(dá)水平(0.44±0.12)明顯高于病毒組小鼠(0.13

8、±0.02)及IgG組小鼠(0.14±0.03)(P均<0.01)。 9.CTLA4-Ig組、病毒組及IgG組的小鼠心肌組織中IL-2、IFN-γmRNA的表達(dá)水平分別與心肌病理積分呈正相關(guān)(分別為r=0.75，p<0.01；r=0.81，p<0.01)，心肌組織中IL-4 mRNA的表達(dá)水平與心肌病理積分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.76，p<0.01)。 10.CTLA4-Ig組、病毒組及IgG組的小鼠血清IL-2水平與心肌組

9、織IL-2mRNA的表達(dá)水平呈低度正相關(guān)(r=0.55,p<0.01)，血清IFN-γ，濃度與心肌組織IFN-γmRNA的表達(dá)水平呈低度正相關(guān)(r=0.51，p<0.01)，血清IL-4水平與心肌組織IL-4mRNA的表達(dá)水平呈高度正相關(guān)(r=0.88,p<0.01)。 結(jié)論: 1.VMC小鼠急性期心肌組織中IL-2、IFN-γmRNA的表達(dá)上調(diào)，與心肌病理積分呈正相關(guān)，IL-4 mRNA的表達(dá)下調(diào)，與心肌病理積分呈負(fù)相

10、關(guān)；血清IFN-γ水平升高，與心肌病理積分呈正相關(guān)，IL-4水平降低，與心肌病理積分呈負(fù)相關(guān)。表明VMC小鼠急性期以Th1細(xì)胞反應(yīng)為主，且Th1細(xì)胞反應(yīng)的強(qiáng)弱一定程度上反映心肌炎癥的輕重程度。 2.CTLA4-Ig融合蛋白可使VMC小鼠死亡率明顯降低，心肌炎癥減輕，心肌病理積分降低，心肌組織CVB3mRNA表達(dá)下調(diào)，表明CTLA4-Ig融合蛋白對VMC小鼠具有一定的治療作用。 3.CTLA4-Ig融合蛋白可使VMC小鼠心

11、肌組織IL-2、IFN-γmRNA表達(dá)下調(diào)，IL-4mRNA表達(dá)上調(diào)；使血清IFN-γ水平降低，IL-4水平升高。表明CTLA4-Ig融合蛋白可使VMC小鼠Th1反應(yīng)減低，Th2反應(yīng)增強(qiáng)，使Th1/Th2平衡向Th2偏移。 4.CTLA4-Ig組、病毒組及IgG組的小鼠血清IFN-γ平與心肌病理積分呈正相關(guān)，血清IL-4水平與心肌病理積分呈負(fù)相關(guān)。表明VMC小鼠外周血細(xì)胞因子IFN-γ與IL-4的含量變化在一定程度上反映心肌炎癥