蜜環(huán)菌菌索多糖對四氧嘧啶損傷的胰島細胞的保護作用.pdf

1、本論文對蜜環(huán)菌菌索多糖進行了分離純化,得到了兩種多糖成分 AMP-1、AMP-2,并對AMP-1進行了研究。研究的內(nèi)容如下:
　　蜜環(huán)菌菌索多糖的提取與純化:蜜環(huán)菌菌索打粹后,進行水提,經(jīng)過醇沉、濃縮合并上清,最后經(jīng)過DEAE-纖維素柱色譜(cl-1型)分離,得到了2種多糖成分AMP-1、AMP-2.采用苯酚-硫酸法,測得AMP-1為均一組分,AMP-2有兩種組分;冷凍干燥后測其得率分別是14.7％,5.7％。
　　蜜環(huán)菌菌

2、索多糖對胰島原代細胞的活性影響:通過原位靜止消化法和Ficoll不連續(xù)密度梯度法對大鼠胰島進行分離純化,并采用DTZ法對大鼠原代胰島進行形態(tài)鑒定,最后通過MTT法探討了AMP-1對AXN損傷的大鼠原代胰島細胞的活性影響。結(jié)果如下:大鼠胰腺消化的最佳條件是膠原酶的濃度是1 mg/mL,沖盈量是6~8 mL,消化溫度是38±1℃,消化時間是10～12 min,消化液pH值是7.6±0.1,并按上述條件進行分離純化,大鼠胰島的收獲量平均是27

3、7±13個胰島/胰腺。當(dāng)AMP-1濃度在100～500 mg·L-1范圍時,AMP-1能顯著提高AXN損傷的大鼠原代胰島細胞的活性。
　　蜜環(huán)菌菌索多糖對AXN損傷的胰島細胞功能的影響:培養(yǎng)大鼠胰島素瘤細胞(INS-1),以AXN損傷細胞,培養(yǎng)液中加入不同濃度的AMP-1(2、10、50、100、500、1000 mg·L-1),用MTT法測細胞存活率;使用放免法檢測不同濃度AMP-1對INS-1細胞葡萄糖刺激的胰島素分泌量的變化

4、;用比色法檢測 INS-1細胞一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)等指標的變化。結(jié)果如下:AMP-1可減少AXN對INS-1細胞的損傷,AMP-1處理組的INS-1細胞存活率增加;在2.8 mmol·L-1、5.6 mmol·L-1、16.7 mmol·L-1葡萄糖刺激下,AMP-1(50、100、500、1000 mg·L-1)劑量依賴性地促進了INS-1細胞葡萄糖刺

5、激性的胰島素分泌;AMP-1能使INS-1細胞NOS活性降低,MDA和NO含量減少,同時增強了SOD的活性,增加了GSH的含量。
　　蜜環(huán)菌菌索多糖對AXN損傷的胰島細胞的抗凋亡作用:培養(yǎng)大鼠胰島素瘤細胞(INS-1),以AXN損傷細胞,培養(yǎng)液中加入不同濃度的AMP-1(10、50、100、500、1000 mg·L-1),通過DNA瓊脂糖電泳和用分光光度法檢測INS-1細胞中Caspase-3活性來檢測AMP-1對AXN損傷的I