川芎嗪對脂多糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用.pdf

1、研究目的：探討川芎嗪(tetramethylpyrazine，TMP)對脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells， HUVECs)中RhoA、Rho相關(guān)卷曲螺旋形成蛋白激酶2(Rho associated coiled coil forming protein kinase2，ROCK2)、肌球蛋白輕鏈(myosin lig

2、ht chain，MLC)磷酸化及埃茲蛋白-根蛋白-膜突蛋白(Ezrin-Radixin-Moesin，ERM)磷酸化表達(dá)的影響，以及肌動(dòng)蛋白纖維(actin filament，F(xiàn)-actin)細(xì)胞骨架在內(nèi)皮細(xì)胞中形態(tài)和分布的變化。
　　研究方法：以體外培養(yǎng)的HUVECs為實(shí)驗(yàn)對象，分為Control組、LPS組(0.1μg/ml)和TMP組(0.5 mg/ml，1.0 mg/ml，1.5 mg/ml)5組，n=6。預(yù)處理：①Co

3、ntrol組和LPS組：培養(yǎng)液中分別加等量的培養(yǎng)基；②TMP組：培養(yǎng)液中分別加入不同濃度的TMP預(yù)處理12 h。預(yù)處理結(jié)束后：①Control組：培養(yǎng)液中加等量的培養(yǎng)基；②LPS組和TMP組：在培養(yǎng)液中分別加入LPS培養(yǎng)12 h。免疫熒光法觀察細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白形態(tài)及分布的變化，熒光定量PCR測定內(nèi)皮細(xì)胞RhoA、ROCK2和p-Ezr mRNA表達(dá)，Western blotting法測定內(nèi)皮細(xì)胞RhoA、ROCK2、p-MLC和p-ER

4、M蛋白水平表達(dá)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：與對照組相比，LPS組F-actin形態(tài)學(xué)發(fā)生明顯改變，胞質(zhì)內(nèi)由F-actin組成的應(yīng)力纖維呈逐漸增多、增粗趨勢，外周致密帶明顯斷裂，細(xì)胞間空洞狀裂隙增大。TMP組F-actin外周致密帶變細(xì)，空洞狀裂隙變小，細(xì)胞形態(tài)明顯好于LPS組。與對照組相比，LPS組RhoA、ROCK2、p-MLC和p-ERM蛋白及RhoA、ROCK2和p-Ezr mRNA表達(dá)均顯著升高(P<0.01)；與LPS組相比，TM

5、P三組RhoA蛋白表達(dá)與mRNA表達(dá)均無顯著差異，且TMP三組之間RhoA的表達(dá)也無顯著差異， ROCK2、p-MLC和p-ERM蛋白及ROCK2、p-Ezr mRNA表達(dá)均明顯降低(P<0.01)，且TMP三組之間ROCK2、p-MLC和p-ERM的分子表達(dá)均有顯著差異。
　　結(jié)論：川芎嗪對脂多糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用可能是通過抑制Rho/ROCK信號通路中ROCK2、p-MLC和p-ERM的表達(dá)，以減弱脂多糖對內(nèi)