睡眠剝奪對大鼠下頜髁突軟骨中MKK4和c-fos表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　 觀察睡眠剝奪后大鼠顳下頜關(guān)節(jié)髁突表面軟骨組織結(jié)構(gòu)的病理變化及絲裂原活化蛋白激酶激酶4(MKK4)和c-fos基因表達(dá)的變化，明確睡眠剝奪對大鼠顳下頜關(guān)節(jié)的影響，探討睡眠剝奪造成顳下頜關(guān)節(jié)損傷的可能機(jī)制，揭示睡眠與顳下頜關(guān)節(jié)紊亂病的發(fā)病之間存在的聯(lián)系。
　　 方法:
　　 將120只成年雌性Wistar大鼠隨機(jī)分為6組:睡眠剝奪2天組（SD2d組）、睡眠剝奪4天組(SD4d組)、睡眠剝奪6天組（SD6

2、d組）、睡眠剝奪8天組(SD8d組)、籠養(yǎng)對照組（CC組）和大平臺對照組（LC組），每組20只。
　　 運(yùn)用改良多平臺法構(gòu)建大鼠睡眠剝奪模型，剝奪大鼠的快速動眼睡眠，各睡眠剝奪組大鼠分別于刺激施加相應(yīng)天數(shù)后處死，CC組和LC組與SD8d組一起處死。處死前，運(yùn)用曠場試驗(yàn)對大鼠的精神狀態(tài)進(jìn)行評估。取血標(biāo)本測定大鼠血清中皮質(zhì)酮(CROT)和促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)的水平變化，對模型的預(yù)測效度進(jìn)行評估。取顳下頜關(guān)節(jié)制作病理切片，HE

3、染色觀察下頜髁突表面軟骨及關(guān)節(jié)盤的形態(tài)學(xué)變化，免疫組織化學(xué)染色及實(shí)時熒光定量PCR檢測下頜髁突表面軟骨中MKK4及c-fos的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.曠場試驗(yàn)中，睡眠剝奪各組大鼠的水平得分及垂直得分均明顯高于對照組大鼠(P＜0.01)。睡眠剝奪各組大鼠血清中CROT和ACTH的含量與對照組大鼠相比顯著升高(p＜0.01)。
　　 2.睡眠剝奪組大鼠隨刺激時間延長，顳下頜關(guān)節(jié)逐漸出現(xiàn)不同程度的病理性改變

4、。HE染色結(jié)果顯示:睡眠剝奪后，大鼠髁突軟骨表面變得粗糙，出現(xiàn)膠原纖維排列紊亂，纖維斷裂，關(guān)節(jié)盤出現(xiàn)裂隙等病理性改變，以睡眠剝奪6天組和8天組較為明顯，病變發(fā)生部位與顳下頜關(guān)節(jié)功能相關(guān)。
　　 3.實(shí)時熒光定量PCR示，CC組與LC組間MMK及c-fos的表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與對照組相比，各睡眠剝奪組MKK4及c-fos的表達(dá)均有顯著差異(P＜0.01)。MKK4的表達(dá)變化呈現(xiàn)隨睡眠剝奪處理時間延長而下降的趨勢，其中2天組與

5、4、6、8天組表達(dá)有顯著差異(P＜0.01)，4、6、8天組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);各睡眠剝奪組c-fos的表達(dá)變化較對照組升高，2天組與8天組表達(dá)有顯著差異(P＜0.01)，剩余各睡眠剝奪組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.改良多平臺法大鼠睡眠剝奪模型通過剝奪大鼠快速動眼睡眠(REM)，使大鼠進(jìn)入應(yīng)激狀態(tài)，產(chǎn)生焦慮、躁動等心理狀態(tài)，是一種比較理想的睡眠剝奪動物模型。