rh-Apo2L聯(lián)合厄洛替尼協(xié)同誘導(dǎo)人肺腺癌A549細(xì)胞凋亡及相關(guān)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　觀察rh-Apo2L、厄洛替尼對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞的增殖抑制作用及促凋亡作用；探討r h-Apo2L聯(lián)合厄洛替尼協(xié)同誘導(dǎo)人肺腺癌A549細(xì)胞凋亡的相關(guān)機(jī)制。
　　方法：
　　1．檢測(cè)rh-Apo2L、厄洛替尼對(duì)A549細(xì)胞體外增殖的影響：采用CCK-8法檢測(cè)不同濃度的rh-Apo2L、厄洛替尼干預(yù)A549細(xì)胞24、48h后，各組細(xì)胞增殖情況，并計(jì)算藥物半數(shù)抑制濃度（IC50）。
　　2．檢測(cè)各組藥物

2、對(duì)A549細(xì)胞凋亡的影響：實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組、rh-Apo2L組、厄洛替尼組、聯(lián)合給藥組。各組別藥物分別干預(yù)A549細(xì)胞48h，觀察其形態(tài)學(xué)變化及熒光染色變化；采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)藥物干預(yù)A549細(xì)胞48h后，各組細(xì)胞凋亡率的變化。
　　3．檢測(cè)各組藥物干預(yù)后A549細(xì)胞相關(guān)蛋白的表達(dá)情況：采用Western blot技術(shù)檢測(cè)各組藥物干預(yù)A549細(xì)胞48h后，p-AKT、p-ERK、BAD蛋白的變化。
　　結(jié)果：
　　1

3、．CCK-8結(jié)果顯示：（1）rh-Apo2L、厄洛替尼在體外對(duì)A549細(xì)胞均具有一定的增值抑制作用，并呈濃度依賴(lài)性。rh-Apo2L對(duì)A549細(xì)胞的24h、48h半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為154.14μg/ml、91.89μg/ml，厄洛替尼對(duì)A549細(xì)胞的24h、48h半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為22.09μg/ml、14.89μg/ml；（2）兩藥聯(lián)合干預(yù)對(duì)A549細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用較單藥組強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）

4、，兩藥相互作用指數(shù)為0.790，提示兩藥聯(lián)合應(yīng)用具有協(xié)同抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。
　　2．FCM檢測(cè)結(jié)果顯示：rh-Apo2L聯(lián)合厄洛替尼干預(yù)A549細(xì)胞48h后，其凋亡率為56.23±3.27％，與rh-Apo2L（15.78±1.33%）、厄洛替尼（14.13±1.83%）單藥組相比，細(xì)胞凋亡率顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3．Western blot結(jié)果顯示：（1）rh-Apo2L單藥作用于A549

5、細(xì)胞可引起p-AKT、p-ERK蛋白水平的上調(diào)；（2）rh-Apo2L聯(lián)合厄洛替尼作用于A549細(xì)胞可下調(diào)p-AKT、p-ERK蛋白水平，并上調(diào)BAD蛋白水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.rh-Apo2L聯(lián)合厄洛替尼干預(yù)A549細(xì)胞顯示出較好的協(xié)同效應(yīng)，可有效提高腫瘤細(xì)胞凋亡率；
　　2.rh-Apo2L引起的p-AKT、p-ERK蛋白水平的上調(diào)可能是A549細(xì)胞對(duì)rh-Apo2L敏感性差的