小分子化合物對人肺腺癌A549細胞的凋亡誘導及凋亡分子機制的研究.pdf

1、研究背景和研究目的： 近年來，肺癌已成為諸多國家中危害最大的癌患，我國已成為世界上第一肺癌大國。肺癌死亡率居于各種惡性腫瘤之首位。在肺癌中，肺腺癌最常見、發(fā)病率最高。因此，治療肺腺癌對于降低肺癌死亡率極其關鍵。 然而迄今為止，肺腺癌細胞凋亡分子機制尚未搞清，阻礙了肺腺癌的有效治療。所以，闡明肺腺癌細胞凋亡分子機制具有重要性和必要性。 化學遺傳學的誕生為研究腫瘤細胞凋亡分子機理提供了新思路。如，依據(jù)化學遺傳學

2、，利用小分子PRIMA-1干預直腸癌細胞信號網(wǎng)絡，發(fā)現(xiàn)：PRIMA-1上調(diào)p21及GADD45蛋白表達，激活JNK通路，誘導p53突變型直腸癌細胞從G2期進入凋亡程序；再如，小分子HAl4-1干擾乳腺癌等多種腫瘤細胞，抑制Bcl-2蛋白功能，降低線粒體膜電位，激活caspase-9，-3，誘導細胞凋亡。資料表明：小分子化合物能直接作用于靶蛋白、可高度實時性地研究細胞內(nèi)動態(tài)變化過程，是研究信號傳導的有力工具。 本研究目的在于：

3、從化學遺傳學角度出發(fā)、以小分子化合物為凋亡誘導工具，干預細胞信號傳導網(wǎng)絡，研究肺腺癌A549細胞凋亡分子機制。 以A549細胞為例研究肺腺癌細胞凋亡分子機制，原因在于：第一A549屬于肺腺癌細胞系；第二A549細胞通常作為一種標準模式細胞，用來研究肺癌治療。目前對于A549細胞凋亡的研究較為零散，從化學遺傳學出發(fā)，利用小分子化合物進行有效干預，進而系統(tǒng)完整性地研究A549細胞凋亡分子機制，在國際上尚屬首例。 本研

4、究所使用小分子化合物為：黃樟素氧化物(3，4-(methylenedioxy)-1-(2’，3’-epoxypropyl)-benzene，SFO)及黃樟素氧化物乙基衍生物(1-ethoxy-3-(3，4-methylenedioxyphenyl)-2-propanol，EOD)。它們均來自于本課題組的小分子化合物庫。本組已往研究發(fā)現(xiàn)，SFO、EOD誘導人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(HUVEC)s分別由G<,2>-M期、S期進入凋亡程序。由于細

5、胞凋亡分子機理極其復雜，不同類型細胞的凋亡機制不同；即使同類型細胞，當受到不同凋亡信號刺激時，凋亡機制也往往存在差異。SFO、EOD能否誘導A549細胞凋亡?凋亡分子機制怎樣?目前，尚未有報道，本文對此進行了探索。本研究不但有助于明晰肺腺癌細胞凋亡的分子機理，而且可為開發(fā)肺腺癌治療藥物提供理論依據(jù)。 研究內(nèi)容 1.初步篩選小分子化合物 2.鑒定小分子化合物對A549細胞的凋亡誘導作用 3.研究A5

6、49細胞凋亡與細胞周期分布、p53基因表達之間的關系 4.研究介導A549細胞凋亡的重要分子及信號通路 5.分析小分子化合物對caspases的激活情況 結(jié)論： 1．SFO、EOD均能抑制A549細胞增殖，但SFO增殖抑制能力強于EOD。 2．SFO通過上調(diào)p53蛋白水平、完全阻滯細胞周期于G<,l>期且部分阻滯于G<,2>-M期、激活Fas/FasL信號通路、激活caspase．8，-