厄洛替尼增強CIK細胞對肺腺癌HCC827細胞的殺傷.pdf

1、背景:
　　肺癌是癌癥死亡的最主要原因。傳統(tǒng)的化療療效已達到了一個平臺期。近年來分子靶向藥物治療已成為晚期非小細胞肺癌(NSCLC)的主要治療手段，特別是表皮生長因子受體(EGFR)突變的患者，能夠明顯從EGFR酪氨酸激酶抑制劑(TKI)中獲益。然而大部分患者治療一段時間后會出現(xiàn)臨床耐藥。近年來EGFR家族藥物聯(lián)合細胞因子誘導的殺傷(CIK)細胞的抗腫瘤治療引起了人們的關注，探討EGFR-TKI對CIK細胞殺傷EGFR突變人肺腺癌

2、HCC827細胞的影響及分子機制，可為NSCLC的治療提供新的思路。
　　目的:
　　觀察EGFR-TKI厄洛替尼及EGFR下游主要分子對人肺腺癌HCC827細胞表面NKG2D配體表達的影響，探討厄洛替尼作用于人肺腺癌HCC827細胞后，CIK細胞對HCC827細胞殺傷活性的變化。
　　方法:
　　1)分別以終濃度為5μmol/L和10μmol/L的厄洛替尼處理HCC827細胞后，用流式細胞儀檢測細胞表面NKG2

3、D配體主要組織相容性復合體Ⅰ類鏈相關蛋白(MIC)A、B及UL16結合蛋白(ULBP)1、2、3表達的變化。
　　2) HCC827細胞培養(yǎng)24h后，分別以EGFR下游分子磷脂酰肌醇3-激酶抑制劑LY294002、絲裂原活化蛋白激酶抑制劑SB203580、信號傳導及轉錄激活因子3抑制劑STAT21、蛋白激酶C抑制劑Rottlerin進行作用，以流式細胞儀分析HCC827細胞表面MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3

4、的表達，并與空白對照組進行比較。
　　3)以CIK細胞為效應細胞，HCC827細胞為靶細胞，乳酸脫氫酶釋放法檢測CIK細胞對未經藥物作用組和厄洛替尼作用后組HCC827細胞的殺傷率，及檢測效靶比20∶1時經NKG2D單抗封閉后的CIK細胞對兩組HCC827細胞的殺傷率。
　　結果:
　　1)與空白對照組比較，厄洛替尼5、10μmol/L組HCC827細胞表面NKG2D配體MICB、ULBP1表達顯著增高(P＜0.05)

5、，MICA、ULBP2、ULBP3表達差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）;厄洛替尼5μmol/L組與10μmol/L組比較，細胞表面NKG2D配體MICA、MICB、ULBPI、ULBP2、ULBP3表達差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，表明鹽酸厄洛替尼增強了EGFR突變型人肺腺癌HCC827細胞表面NKG2D配體的表達;
　　2)與空白對照組比較，SB203580組的HCC827細胞表面NKG2D配體MICA、MICB、ULBP

6、I、ULBP2、ULBP3表達差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，STAT21組的HCC827細胞表面NKG2D配體MICA、MICB表達增高(P＜0.05)，LY294002組的MICA表達降低(P＜0.05)，Rottlerin組的ULBP1表達增高(P＞0.05)，表明EGFR下游信號分子參與了HCC827細胞NKG2D配體表達的調控，抑制這些信號分子，可影響HCC827細胞NKG2D配體的表達;
　　3)同一效靶比時，CIK

7、細胞對厄洛替尼作用后組HCC827細胞的殺傷率均顯著高于未經藥物作用組(P＜0.05)，效靶比20∶1時經NKG2D單抗封閉后的CIK細胞對未經藥物作用組和10μmol/L厄洛替尼作用后組HCC827細胞的殺傷率比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05），表明鹽酸厄洛替尼可增強CIK細胞對EGFR突變型人肺腺癌HCC827細胞的殺傷活性。
　　結論:
　　鹽酸厄洛替尼通過上調EGFR突變型人肺腺癌HCC827細胞表面NKG2D配體