水貂源犬瘟熱病毒的分離鑒定及H基因的序列分析.pdf

1、犬瘟熱是由犬瘟熱病毒(canine distemper virus，CDV)引起的一種急性、傳染性極強的烈性傳染病。CDV屬于副粘病毒科麻疹病毒屬，該病毒只有一個血清型不同毒株擁有共同的可溶性抗原，各毒株在抗原性上沒有區(qū)別。該病毒呈世界性分布，自然條件下感染肉食目中犬科、鼬科、浣熊科等多種動物，尤其對毛皮經(jīng)濟動物危害嚴(yán)重。特種經(jīng)濟動物因為其本身的經(jīng)濟價值很高，一旦發(fā)生傳染病損失嚴(yán)重，因此有必要對患傳染病的動物進行治療和緊急預(yù)防，將損失降

2、到最小。但目前犬瘟熱沒有治療的良方，只能通過疫苗來控制。因此犬瘟熱疫苗的研究一直是世界各地學(xué)者研究的熱點。 本實驗采用Vero細胞從山東某貂場的疑似CD的貂肝臟內(nèi)分離出1株病毒，對其培養(yǎng)特性、細胞毒力、生物學(xué)特性、免疫學(xué)和分子生物學(xué)鑒定。經(jīng)鑒定該病毒為犬瘟熱病毒(CDV)，命名為CDVSJ。根據(jù)GeneBank中所發(fā)表的CDV Onderstepoort株的H基因設(shè)計了1對特異性引物，對CDVSJ H基因進行RT-PCR擴增，擴

3、增產(chǎn)物與pMD18-Tsimple vector連接，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌JM109感受態(tài)細胞中進行克隆。提取質(zhì)粒進行PCR和雙酶切鑒定，鑒定為陽性的送去測序。去掉兩端酶切位點測出長1596bp的目的基因條帶與預(yù)計的完全相符。并將測序結(jié)果與Genebank中發(fā)表的15個CDV株的核苷酸序列和推導(dǎo)的氨基酸序列進行了比較分析。分析的結(jié)果表明：所有的基因分為2組，一組由弱毒株組成，另一組由野生型組成一組，野生型又可分為不同的基因型。本實驗室分離的C

4、DVSJ在基因進化樹上與弱毒為一組，它與國內(nèi)的低毒疫苗株strain CDV3的核苷酸序列和推導(dǎo)的氨基酸序列的同源性均最高分別為99.1％和98.1％，而與野生型Hamamatsu核苷酸和推導(dǎo)的氨基酸序列的同源性均最低分別為90.9％和90.4％。編碼氨基酸比較結(jié)果，所有毒株都含有12個半胱氨酸殘基，其中只有strain CDV3有一處不同在414位(其它在304位)，在CDV毒株中半胱氨酸殘基是很保守的。CDVSJ此段H基因含有5個潛

5、在的天冬氨酸糖基化位點；此段疫苗株僅含3個；strain CDV3和Convac都含有6個與分離株不同的在530aa～532aa；Hamatsu有8個，其它3處在236Aa～238Aa、511aa～513aa和530aa～532aa；Danish dog有7處，其它在236Aa～238Aa和530aa～532aa。在511aa～513aa是Hamamatsu強毒株所特有的而弱毒株沒有的。 本實驗通過對該分離株的研究表明，該分離株