水貂源犬瘟熱病毒的分離鑒定及H基因的序列分析.pdf

1、犬瘟熱是由犬瘟熱病毒(canine distemper virus，CDV)引起的一種急性、傳染性極強(qiáng)的烈性傳染病。CDV屬于副粘病毒科麻疹病毒屬，該病毒只有一個(gè)血清型不同毒株擁有共同的可溶性抗原，各毒株在抗原性上沒(méi)有區(qū)別。該病毒呈世界性分布，自然條件下感染肉食目中犬科、鼬科、浣熊科等多種動(dòng)物，尤其對(duì)毛皮經(jīng)濟(jì)動(dòng)物危害嚴(yán)重。特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物因?yàn)槠浔旧淼慕?jīng)濟(jì)價(jià)值很高，一旦發(fā)生傳染病損失嚴(yán)重，因此有必要對(duì)患傳染病的動(dòng)物進(jìn)行治療和緊急預(yù)防，將損失降

2、到最小。但目前犬瘟熱沒(méi)有治療的良方，只能通過(guò)疫苗來(lái)控制。因此犬瘟熱疫苗的研究一直是世界各地學(xué)者研究的熱點(diǎn)。 本實(shí)驗(yàn)采用Vero細(xì)胞從山東某貂場(chǎng)的疑似CD的貂肝臟內(nèi)分離出1株病毒，對(duì)其培養(yǎng)特性、細(xì)胞毒力、生物學(xué)特性、免疫學(xué)和分子生物學(xué)鑒定。經(jīng)鑒定該病毒為犬瘟熱病毒(CDV)，命名為CDVSJ。根據(jù)GeneBank中所發(fā)表的CDV Onderstepoort株的H基因設(shè)計(jì)了1對(duì)特異性引物，對(duì)CDVSJ H基因進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，擴(kuò)

3、增產(chǎn)物與pMD18-Tsimple vector連接，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌JM109感受態(tài)細(xì)胞中進(jìn)行克隆。提取質(zhì)粒進(jìn)行PCR和雙酶切鑒定，鑒定為陽(yáng)性的送去測(cè)序。去掉兩端酶切位點(diǎn)測(cè)出長(zhǎng)1596bp的目的基因條帶與預(yù)計(jì)的完全相符。并將測(cè)序結(jié)果與Genebank中發(fā)表的15個(gè)CDV株的核苷酸序列和推導(dǎo)的氨基酸序列進(jìn)行了比較分析。分析的結(jié)果表明：所有的基因分為2組，一組由弱毒株組成，另一組由野生型組成一組，野生型又可分為不同的基因型。本實(shí)驗(yàn)室分離的C

4、DVSJ在基因進(jìn)化樹(shù)上與弱毒為一組，它與國(guó)內(nèi)的低毒疫苗株strain CDV3的核苷酸序列和推導(dǎo)的氨基酸序列的同源性均最高分別為99.1％和98.1％，而與野生型Hamamatsu核苷酸和推導(dǎo)的氨基酸序列的同源性均最低分別為90.9％和90.4％。編碼氨基酸比較結(jié)果，所有毒株都含有12個(gè)半胱氨酸殘基，其中只有strain CDV3有一處不同在414位(其它在304位)，在CDV毒株中半胱氨酸殘基是很保守的。CDVSJ此段H基因含有5個(gè)潛

5、在的天冬氨酸糖基化位點(diǎn)；此段疫苗株僅含3個(gè)；strain CDV3和Convac都含有6個(gè)與分離株不同的在530aa～532aa；Hamatsu有8個(gè)，其它3處在236Aa～238Aa、511aa～513aa和530aa～532aa；Danish dog有7處，其它在236Aa～238Aa和530aa～532aa。在511aa～513aa是Hamamatsu強(qiáng)毒株所特有的而弱毒株沒(méi)有的。 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)該分離株的研究表明，該分離株